SYTOX Blue Dead Cell Stain (1 mM in DMSO), for flow cytometry

蓝色荧光核酸染料（用于流式细胞分析）

产品信息

产品描述

SYTOX Blue死细胞染料（SYTOX Blue Dead CellStain）是一种简单且定量的一步法死细胞指示剂，配合流式细胞仪的紫光激光器（Violet laser）来使用。SYTOX Blue是一种高亲和力的核酸染料，轻易渗透进入受损的细胞质膜，但不能穿透活细胞膜。探针只需简单孵育，使用405nm紫光激光器进行激发，死细胞的核酸则发明亮的蓝色荧光。SYTOX Blue这一用紫光激发的特征，使其与大部分其他激光器激发的染料都区分开，从而适用于与其他染料进行多重染色。

本品以DMSO储存液形式提供，浓度为1mM。按照每1ml细胞悬液（1×105~5×107个细胞）加入1µl染色液，简单孵育即可。

产品特性

1） 同义名：SYTOXBlue dye；SYTOXBlue死细胞染料；SYTOXBlue细胞核染料；

2） 外观：黄色溶液

3） 荧光特征：Abs/Em=444/480nm（与DNA结合）（图1），需注意细菌或真核细胞中SYTOXBlue的光谱特征可能发生变化。

4）渗透性：不能进入活细胞

保存与运输方法

保存：≤–20ºC避光干燥保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

应用示例

文献来源1）D. Manoil, S. Bouillaguet et al.Oxidative Stress in Bacteria Measured by Flow Cytometry.Adv Biotech & Micro 8(1): AIBM.MS.ID.555726 (2018)

实验目的：用SYTOX Blue评估细菌膜的完整性。

染色对象：E. faecalis、F. nucleatum    

染色方法：E. faecalis和F. nucleatum用不同浓度的H2O2（0-980mM）处理15min，之后用Cellrox deep red（4uM）孵育30min。之后样本进行超声20s，然后加入4uMSYTOX Blue，继续孵育15min。整个过程都是对活细胞进行染色（没有甲醛固定）。Cellrox deep red（Ex/Em：644/665nm）用FL6通道（BP660/20），

SYTOX Blue（Ex/Em：444/480nm）用FL9通道（BP450/50）收集信号。

Fig 1. Flow cytometric dot plots of Enterococcus faecalis (A-D) and Fusobacterium nucleatum (E-H) exposed to different concentrations of H2O2, labeled with 4μM CellROX® Deep Red and 4μM SYTOX® Blue. CellROX® Deep Red fluorescence (660/20nm) on the X-axis is plotted against the SYTOX® Blue fluorescence (450/50nm) on the Y-axis. Numbers below each quadrant represent the percentage of events.

染色流程（更多内容见说明书）

① 从冰箱取出染料，置于室温（或25℃温育）使其完全融化。

② 收集细胞样本。用合适的缓冲液调整细胞密度到：1×105~5×107个细胞/ml。

③ 准备含1ml细胞悬液的流式管。

④ 每管加入1µl SYTOX Blue（1mM）。染色的最终浓度是1µM，初次实验请进行条件优化。

⑤ 室温避光孵育至少5min，整个染色反应不要超过30min。

⑥ 不用清洗，也不要做固定，直接进行样本分析。用405nm紫光激发器激发，用440/40nm或530/30nm带通滤光片来收集信号。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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