Peroxyfluor 1 (PF1)  过氧化氢荧光探针

产品信息

产品描述

过氧传感器家族（Peroxysensor family）是由加州大学伯克利分校（UC Berkeley）研究员开发的一类新的过氧化氢荧光探针。这类探针利用硼酸酯去保护机制在水溶性环境中高度特异性和光学动力范围内检测过氧化氢（H2O2），不受类似活性氧（ROS）包括：超氧化物、一氧化氮、叔丁基过氧化氢和羟基自由基的干扰。

Peroxyfluor 1（PF1）是这类新成员中的第一代过氧化氢荧光探针，具细胞膜渗透性，可直接成像观察细胞内过氧化氢（H2O2）的变化。作用机制在于：天然状态、硼酸酯笼蔽的PF1是闭合型的内酯形式，基本无荧光。一旦与过氧化氢（H2O2）反应，硼酸酯基团被切割，释放出强荧光分子，发绿色荧光（Ex：~450nm，Em：~530nm）（见Fig 1）。这一“开启式”的荧光响应机制使其能检测到活细胞（包括：海马神经元）内微摩尔量变化的过氧化氢[1]。

Fig 1. Peroxyfluor 1 (PF1)与H2O2的反应流程图

产品特性

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

2） 整个染色过程中需注意避光。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、储存液制备

于实验前，将低温保存的产品置于室温平衡至少20min，条件允许低速离心几分钟将粉末沉到瓶底。于超净台内打开瓶盖，直接往瓶内加入适量新鲜开封、高质量无水DMSO配制成5mM或其他浓度的储存液。

比如：往1mgPeroxyfluor 1 (Mw:552.23)加入362.168μl DMSO，将其完全溶解即得到5mM储存液。将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存（约1个月稳定），置于-80℃避光保存（约6个月稳定）。

二、工作液制备

于正式实验前，用合适的生理缓冲液（比如：HBSS、HHBS）或细胞培养基将其稀释到所需的工作浓度，比如：5μM。最佳的工作浓度需参阅文献，初次实验需设置梯度浓度自行优化。工作液需现配现用！

三、细胞染色（仅作参考）

染色示例【源自文献，仅作参考】

文献来源：Miller EW, Albers AE, Pralle A, Isacoff EY, Chang CJ. Boronate-based fluorescent probes for imaging cellular hydrogen peroxide. J Am Chem Soc. 2005 Nov 30;127(47):16652-9. doi: 10.1021/ja054474f. PMID: 16305254; PMCID: PMC1447675.

Fig 2.Confocal fluorescence images of live HEK cells. (a) Fluorescence image of HEK cells incubated with 5 μM PF1 for 5 min at 25 °C. (b) Fluorescence image of PF1-stained HEK cells treated with 100 μM H2O2 for 11 min at 25 °C. Excitation was provided at 488 nm, and emission was collected in a window from 505 to 580 nm. Scale bar = 27 μm.

Fig 3.Confocal fluorescence images of live rat hippocampal neurons. (a) Fluorescence image of neurons incubated with 10 μM PF1 for 5 min at 25 °C. (b) Fluorescence image of PF1-stained neurons treated with 300 μM H2O2 for 30 min at 25 °C. Excitation was provided at 488 nm, and emission was collected in a window from 505 to 580 nm. Scale bar = 50 μm.

参考文献

[1]Miller EW, Albers AE, Pralle A, Isacoff EY, Chang CJ. Boronate-based fluorescent probes for imaging cellular hydrogen peroxide. J Am Chem Soc. 2005 Nov 30;127(47):16652-9. doi: 10.1021/ja054474f. PMID: 16305254; PMCID: PMC1447675.

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