SHuffle T7 Express lysY Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

【常见问题】：贵司提供三款SHuffle T7化学感受态细胞，如何选择呢？

基于两种不同的大肠杆菌菌株，有两个版本的SHuffle T7菌株。SHuffle T7（货号：MF2291）是基于大肠杆菌K12改造，而SHuffle T7 Express lysY（货号：MF2289）和SHuffle T7 Express E. coli B（货号：MF2290）是基于大肠杆菌B菌株改造。我们发现，相同蛋白在不同菌株中的折叠和表达水平都有差异，目前来说，无法直接预测哪款菌株能更成功的折叠某一款既定的含二硫键蛋白。因此，我们建议客户在初次实验中，可自行比较目的蛋白在不同菌株中的表达，从而选择更适合的菌株。一旦确定好菌株后，再进行表达条件的优化（比如：温度、诱导强度和时间等）。

所有的Shuffle菌株都能用于非T7启动子（比如：lac和ara启动子表达载体）。对于T7启动子表达载体，建议要么选择SHuffle T7（货号：MF2291）或SHuffle T7 Express E. coli B（货号：MF2290）。对于毒性T7启动子表达，建议选择SHuffle T7 Express lysY（货号：MF2289）。

菌株描述：

SHuffle T7 Express lysY菌株是SHuffle T7 ExpressE. coliB的衍生菌株，特别设计以增强含多个二硫键蛋白在细胞质内的正确折叠，并且降低本底表达，适合于T7启动子驱动的蛋白表达。

SHuffle T7 Express lysY菌株含lysY质粒（氯霉素抗性），这个质粒含表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，同时不干扰IPTG的诱导表达，适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。SHuffle T7 Express lysY菌株的染色体中整合一个拷贝的二硫键异构酶基因—DsbC，促进错误氧化的蛋白转化为正确形式。另外，细胞质中的DsbC也是一个分子伴侣，能协助不含二硫键蛋白的正确折叠。该菌株缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，可减少对重组蛋白的降解。

SHuffle T7 Express lysY菌株染色体中整合一个拷贝的T7 RNAP基因，可以表达噬菌体T7 TNA聚合酶，从而适用于T7启动子诱导的蛋白表达。该菌株还能表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 Express lysY菌株具抵抗噬菌体T1（fhuA2）感染的特点，具链霉素、壮观霉素和氯霉素抗性。

SHuffle T7 Express lysY菌株基因型：MiniF lysY (CamR) /fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

产品描述

本品是SHuffle T7 Express lysY菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19载体检测转化效率>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品组分：

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存（避免温度波动），不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上缓慢融化感受态细胞。不可在冰上放置时间过长，否则会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用

7） SHuffle T7 Express lysY菌株具链霉素、壮观霉素、氯霉素抗性，不可用于具链霉素、壮观霉素和氯霉素抗性质粒的转化。

8） 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度、IPTG浓度（0.1~10mM）都需进行优化。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的质粒，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

相关产品：

附表1固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。