IPC200 Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

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产品组分：

菌株描述

EPI400菌株因其能够明显降低各种常用载体的拷贝数，特别适用于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。但该菌株制备所得的感受态转化效率偏低，在一定程度上限制其应用。针对这个问题，我们对EPI400菌株进行改造。将EPI400核基因中控制DNA甲基化和限制性修饰的三个关键性修饰系统进行突变，优化基因组背景，删除链霉素抗性基因，同时改造pcnB基因的启动子，获得一新的菌株命名为IPC200。

IPC200菌株不仅维持EPI400菌株的优点，通过显著降低质粒拷贝数，减弱基因毒性，同样适用于各种不稳定或毒性基因的克隆；最为突出的是转化效率比EPI400提高~22倍，明显提高载体构建成功率。

【更多特征】：

endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；

lacZΔM15标记的存在，使EPI400适用于蓝白斑筛选；

tonA赋予EPI400具抗噬菌体T1和T5的能力； 

IPC200菌株基因型：F- hsdR(rK- mK+) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

产品描述

本品是大肠杆菌IPC200菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。

【注意】：

a）若克隆毒性基因，请在固体培养基中加入质粒复制抑制剂（Inhibitor of plasmid replication）。一般情况，按1%的比例加入冷却到55℃左右的培养基，之后倒固体平板。若基因毒性很强，可按2%的比例加到培养基中。

b）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

c）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

d）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

e）IPC200，EPI400以及EPI300菌株之所以能克隆毒性基因，都是通过降低质粒拷贝数来达到目的。那在质粒的提取时，一致推荐在液体培养基中加入诱导液（CopyCutter Induction Solution），快速诱导质粒到高拷贝状态，以提高质粒产量。一般情况，经诱导后的质粒产量比未诱导时提高10~100倍。 

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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