Cal-590 AM, Cell Permeant  钙离子荧光探针

重要提醒（购买或初次使用前）请务必查阅：

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

产品标签

Cal-590 AM; Cal-520 AM;钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品描述

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。

新一代钙离子荧光探针：Cal-520，Cal-590和Cal-630是最强大且均一的细胞内钙流（Calciummobilization）测定用荧光探针，与传统的钙离子探针（比如：Fluo-3 AM、Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有明显改善的信噪比和细胞内滞留性。

Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM具有细胞膜渗透性，能够预加载进入细胞。一旦进入细胞候，亲脂阻断基团AM被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内部。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。当细胞被激动剂刺激后，受体发出细胞内钙释放的信号，从而使得Cal-520，Cal-590和Cal-630的荧光增加。Cal-520 AM，Cal-590 AM和Cal-630 AM的高灵敏度以及>100倍的荧光增强使其成为胞内钙离子测定的理想探针。高信噪比和更加的胞内滞留性使其成为评估GPCR和钙离子通道靶标以及筛选对应激动剂和拮抗剂的优秀工具。

Cal-520，Cal-590和Cal-630基本定位在细胞质，不像Rhod-2主要定位在线粒体。Cal-590和Cal-630的长激发/发射波长使其为完美的钙离子探针，能够与绿色荧光蛋白（GFP）标记细胞兼容多色检测。另外，Cal-520，Cal-590和Cal-630也与绝大多数现存的荧光仪器兼容。Cal-520在488nm处被良好激发，用FITC滤片检测；Cal-590经优化在555nm处被良好激发，用TRITC/Cy3滤片检测；Cal-630经优化在594nm处被良好激发，用Texas Red滤片检测；

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

产品特性

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Cal-590, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Cal-590, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mgPluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4)或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Cal-590 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-590 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µgCal-590 AM中加入9.8µl无水DMSO）。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将Cal-590 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20%Pluronic F-127溶液到Cal-590 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Cal-590 AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Cal-590 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液内（在孔内的最终浓度为0.5-1mM），以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4） 加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育60-90min。然后，室温再孵育30min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于2h能提供更好的信号。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 之后在HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）中，用合适的激发/发射波长来检测荧光（见产品特性：Cal-590 AM的激发和发射光谱）。

【注①】：对于荧光显微镜检测，建议用TRITC/Cy3滤片来检测，建议用黑框/透明底的细胞培养板。

【注②】：对于荧光酶标仪检测，建议用激发波长：540nm，发射波长590nm，cut-off波长570nm来检测，建议用黑框/透明底的96孔板；

附录ICal-520，Cal-590或Cal-630钙离子探针的波长和钙离子结合特性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

引用文献：

[1]   Zhang, Y., Wu, Q., Bai, F. et al. Granulosa cell-specific FOXJ2 overexpression induces premature ovarian insufficiency by triggering apoptosis via mitochondrial calcium overload. J Ovarian Res 18, 75 (2025).https://doi.org/10.1186/s13048-025-01651-0

The fluorescent dye Rhod-5 N AM and Cal-590 AM (MX4535-50UG, Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. China) were used to measure Ca2+ levels in the endoplasmic reticulum and cytosol, respectively, in GCs, according to the manufacturer’s instructions. Briefly, after being digested and washed with D-HBSS, the GCs were incubated with 4 µM Rhod-5 N AM or Cal-590 AM containing 0.04% Pluronic F-127 for 60 min at 37 °C and then for 30 min at room time. Following another wash with D-HBSS, the Ca2+ levels in the endoplasmic reticulum and cytosol of the GCs were immediately measured using CytoFlex S (Beckman) at PE channel, respectively.

[2] Xinlong Ke et al.  TRPC4 Mediates Trigeminal Neuropathic Pain via Ca2+-ERK/P38-ATF2 Pathway in the Trigeminal Ganglion of Mice.CNS Neuroscience & Therapeutics Volume31, Issue4  April 2025  e70368

2.10 Calcium Imaging

Trigeminal ganglion (TG) neurons were incubated with Fura-4 AM (4 μM, No. 2090588, Invitrogen), and HEK 293 cells were incubated with Cal-590 (4 μM, MX4535, MKBio) in a cell culture incubator at 37°C for 20 min in the dark. The confocal dishes containing TG neurons or HEK 293 cells were rinsed with Artificial Cerebrospinal Fluid (ACSF) (No. R22153, Shyuanye, China) and subsequently mounted on a total internal reflection fluorescence microscope (Olympus IX83, Japan). The fluorescence intensity was measured at excitation wavelengths of 491 nm and 561 nm using a computer-controlled fluorescence spectrophotometer, with detections made at 1-s intervals and recorded for a duration of 5 min. The digital images were saved onto a hard drive for subsequent offline analysis. The fluorescence intensity at these two wavelengths was recorded separately, serving as indicators of the relative intracellular Ca2+ levels.

[3]Deng, Bl., Lin, Dx., Li, Zp. et al. High Hydrostatic Pressure Exacerbates Bladder Fibrosis through Activating Piezo1. CURR MED SCI 44, 718–725 (2024).https://doi.org/10.1007/s11596-024-2881-3

Cal-520 AM, Cell Perment (Shanghai Maokang Biotechnology, China) was used to evaluate
the calcium influx of fibroblasts. 

[4]Wang YS, Li BY, Xing YF, Huang JC, Chen ZS, Yue L, Zou YG, Guo B. Puerarin Ameliorated PCOS through Preventing Mitochondrial Dysfunction Dependent on the Maintenance of Intracellular Calcium Homeostasis. J Agric Food Chem. 2024 Feb 14;72(6):2963-2976. doi: 10.1021/acs.jafc.3c06361. Epub 2024 Feb 2. PMID: 38305024.

GCs were incubated with Cal-520 AM (Maokang Biotechnology) and then counterstained

[5]Zhang Z, Luo Y, Ma Y, Zhou Y, Zhu D, Shen W, Liu J. Photocatalytic manipulation of Ca2+ signaling for regulating cellular and animal behaviors via MOF-enabled H2O2 generation. Sci Adv. 2024 Apr 19;10(16):eadl0263. doi: 10.1126/sciadv.adl0263. Epub 2024 Apr 19. PMID: 38640246; PMCID: PMC11029810.

Fluo-8 AM (#MX4505, Shanghai Maokang Biotechnology, 50 μg) 

Pluronic F-127 (#MS4301, Shanghai Maokang Biotechnology)

 The staining solution consisted of 4 μl of 1.5 mM Cal-520 AM solution in DMSO (#MX4537, Shanghai Maokang Biotechnology), 2 μl of Pluronic F-127 (#MS4301, Shanghai Maokang Biotechnology),

[6]Li, R., Kang, Y., Ran, N. et al. Micro-nano microbial fuel cell-driven bioelectrochemical tumor therapy. Nat Commun 16, 8989 (2025).https://doi.org/10.1038/s41467-025-64023-8

Washington State Probe-1 (WSP-1) and Cal-520 were obtained from MKbio

[7]Qi R, Kang Y, Li X, Zhang X, Han Y, Cai R, Gao Y and Qi Y (2021) Forsythiasides-Rich Extract From Forsythiae Fructus Inhibits Mast Cell Degranulation by Enhancing Mitochondrial Ca2+ Uptake. Front. Pharmacol. 12:696729. doi: 10.3389/fphar.2021.696729

Fluo-3 AM Ester, Calcium Green-5N and Cal-630 AM Ester were from Biotium (San Francisco, CA, United States), Invitrogen (Carlsbad, CA, United States) and MKbio (Shanghai, China), respectively.

[8]Li YK, Liu YJ, Zhang YY, Li YL, Li C, Song QX, Zhou C, Liu F, Shen JF. Alternative Splicing of the NMDA Receptor Subunit GluN1 Mediated by Polypyrimidine Tract-Binding Protein Dimerization in the Trigeminal Ganglion Contributes to Orofacial Allodynia. J Neurochem. 2025 Sep;169(9):e70220. doi: 10.1111/jnc.70220. PMID: 40910375.

using the Cal-630 AM fluorescent calcium indicator (MKBio, China; Cat. No. MX4536).

[9] Chen Li et al.Unveiling the neuroprotective power of mitochondrial transfer in orofacial inflammatory pain through ER membrane remodeling. Cell Reports Volume 45, Issue 1, 27 January 2026, 116809

 Cal-630 AM (MKBio, China;)