Cal-500 AM, Cell Permeant  钙离子荧光探针

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Cal-500 AM; Cal-520 AM;钙离子荧光探针; Fura-2 AM; Fluo-8 AM; Rhod-2 AM; Ionomycin, Free Base离子霉素;

产品信息

产品描述

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。

Cal-500是一款紫外激发的钙离子荧光探针，最大发射波长~500nm。斯托克斯位移大于100nm。也能用405nm蓝紫色激发器激发，中等钙亲和探针，Kd值~303nM。Cal-500的激发光谱和FITC、Alexa Fluor 488和GFP能良好的区分，因此，适合与GFP细胞系、FITC/AlexaFluor 488标记的荧光素或其他红色标记的荧光素进行多重标记实验。在CHO和HEK细胞中，Cal-500 AM具良好的细胞钙响应。

Cal-500 AM具有细胞膜渗透性，能够预加载进入细胞。一旦进入细胞，AM基团被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内部。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。一旦与钙离子结合后，它们的荧光显著加强。当细胞被激动剂刺激后，受体发出细胞内钙释放的信号，从而使得Cal-500的荧光增加。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

运输：冰袋运输。

产品特性

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2-7.4)或者其他生理缓冲液

B，储存液和工作液（2×）准备

1） 用无水DMSO溶解Cal-500 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-500 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µgCal-500 AM中加入12.3µl无水DMSO）。

【注①】：用DMSO重溶的Cal-500 AM是无色透明溶液。

2） 用含0.04% Pluronic F-127的HHBS或其他生理缓冲液将Cal-500 AM+DMSO储存液稀释到2-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20%Pluronic F-127溶液到Cal-500 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Cal-500 AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Cal-500 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液内（在孔内的最终浓度为0.5-1mM），以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

C，染色步骤（以下步骤仅做参考，用户根据特定实验需求做调整。）

1） 用生长培养基，过夜培养细胞；

2） 往细胞培养板内加入等体积的2×染色工作液使其为1×。如果血清与药物会有反应或干扰，加入染料前，先将生长培养基更换成新鲜的HHBS。

3） 37℃孵育30-60min。

4） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

5） 之后在HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）中，用合适的激发/发射波长来检测荧光（见产品特性：Cal-500 AM的激发和发射光谱）。如有必要加入刺激剂，同时检测荧光。

【注①】：对于荧光显微镜检测，建议用DAPI滤片来检测，建议用黑框/透明底的细胞培养板

【注②】：对于荧光酶标仪检测（要用带自动液体处理系统比如FDSS、FLIPR或FlexStation），建议用激发波长：400nm，发射波长500nm，cut-off波长470nm来检测，建议用黑框/透明底的96孔板；仪器设置：底部读数且携带自动液体处理系统。

附录ICal系列钙离子探针的波长和钙离子结合特性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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