ThiolTrace Violet 500 (glutathione detection reagent)

谷胱甘肽检测探针

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产品信息

产品描述

还原型谷胱甘肽（GSH）的亚细胞检测和定位对于了解氧化还原态的调节、药物的作用效应以及脱毒机制方面十分重要。有文献报道不同细胞亚群在应对氧化应激时的GSH水平存在差异，因此，适用于流式细胞分析和自动化荧光检测的GSH检测探针的开发非常重要。比较于常用的GSH检测探针：单溴二胺（mBBr，MX5315）、单氯二胺（mBCl，MX5318），以及Thiotracker™ Violet，ThiolTrace™ Violet 500是一款更明亮和更稳定的细胞内硫醇探针（Thiol probe），用于监测胞内硫醇。由于GSH代表细胞内的绝大多数游离硫醇，因此，ThiolTrace™ Violet 500能用来评估细胞内GSH的水平。

ThiolTrace™ Violet 500具有以下优势：

j 比mBCl和其他常用的胞内硫醇染料（比如：Thiotracker Violet）至少明亮10×；在含生长因子的细胞培养基内，ThiolTrace Violet 500比Thiotracker Violet的荧光强度高10-100倍（见附图I）。

k 能用紫外（UV）或405nm波长激发，最大发射波长~525nm（见附图II）。

l 能用醛类固定和0.5% Triton X-100透化。

m 能用于多通路分析，包括细胞毒性研究。

n 兼容于各种稀释溶液包括含血清的细胞培养基。

o 操作简单，只需37℃孵育30min即可进入细胞内；

p 适用于多种检测方法，包括：流式细胞术、HCS成像和落射荧光显微镜。

以MX5322-500T包装为例，用于荧光显微镜检测，按照200μl工作液/孔，可以做500个孔。用于流式分析，按照500μl/次，可以做200次。

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   整个染色过程中需注意避光。

2）   ThiolTrace™ Violet 500（500× in DMSO）在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品使用

一、储存液制备

j 第一次使用，将低温保存的ThiolTrace™ Violet 500置于室温回温至少20min。

k 低速离心3~5min，使粉末完全沉淀至管底。

l 于超净台内开盖，往管内加入200μl高质量无水DMSO，用枪上下吹吸，使其完全溶解后，即得到ThiolTrace Violet 500储存液（500×），尽快使用。用不完的，请根据单次用量分装（比如：10~50μl/管），≤-20℃避光密封干燥保存，避免反复冻融，6个月内使用。

【注j】：务必用高质量无水且新开封的DMSO溶解粉末，否则会影响化合物的溶解性和保存中的稳定性。

【注k】：DMSO溶液在低温（16℃以下）是凝固的，务必置于25℃水浴或金属浴至少20min使其彻底融化。之后，低速离心将所有溶液全部沉降至管底，再开盖使用。

二、工作液准备

于实验前，取1μl ThiolTrace Violet 500储存液（500×）加入500μl生理缓冲液（比如：HBSS、HHBS），充分混匀，即得到所需的染色工作液，染色工作液现配现用；

【注】：也可以用不含血清的细胞培养基来配制染色工作液。

三、操作流程（96孔板荧光成像，黑框透明底板）

3.1 如有需要，用待测化合物处理细胞（细胞密度：5×105~1×106细胞/孔）一段时间，去除培养基。

【注】：适宜的处理时间因细胞类型和细胞密度的不同而有差异，每次实验都推荐优化处理时间。

四、操作流程（流式分析）

4.1 如有需要，用待测化合物处理细胞（细胞密度：5×105~1×106细胞/孔）一段时间。

【注j】：适宜的处理时间因细胞类型和细胞密度的不同而有差异，每次实验都推荐优化处理时间。

【注k】：对于贴壁细胞，用0.5mM EDTA处理细胞使其漂浮以维持细胞完整，染色前用含血清的培养基清洗细胞一次。

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附图I. ThiolTrace Violet 500与Thiotracker Violet的染色效果图

图1. 含细胞培养基的Jurkat细胞分别用ThiolTrace Violet 500与Thiotracker Violet标记。染色流程：Jurkat细胞于37℃，5% CO2培养箱中用ThiolTrace Violet 500与Thiotracker Violet孵育20min。用流式细胞仪（Pacific Orange通道）测定荧光值。

附图II. ThiolTrace Violet 500的光谱图

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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