| 目录号 | MF2494-5000UL | 售价 | 1356.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 50×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -80℃ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 化学感受态细胞 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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产品简介: DH5α λpir Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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菌株描述 DH5α λpir菌株来源于DH5α，在DH5α菌株的基因组中引入λpir，使得菌株可以表达PIR蛋白，让含R6Kg ori复制子的质粒得以正常复制。DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。lacZΔM15的存在使DH5α λpir可用于蓝、白斑筛选。
DH5α λpir菌株基因型： F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
产品描述 本品是大肠杆菌DH5α λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
保存与运输条件 保存：-80℃保存，六个月有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。 2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。 4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。 5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。 6） DH5α λpir菌株生长缓慢，在平板上培养或液体摇菌时都要延长菌体生长时间（37℃，18h以上）。 7） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。 8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。 2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。 3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养70min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（至少18h）。 【注意】： a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。 b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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