| 目录号 | MF2474-0500UL | 售价 | 650.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 10×50μl | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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产品简介: EHA105(pSoup) Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞
产品标签： EHA105菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif） 利福平；Kanamycin（kan）卡那霉素；EHA101；LBA4404；GV3101；AGL1；植物转基因研究；
产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。
产品描述： EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，染色体背景为C58，核基因含筛选标签—利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105（pTiBo542DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。在EHA105菌株中转入help质粒：pSoup，即得到：EHA105 (pSoup)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tetR）抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
我司（懋康生物）提供的EHA105(pSoup)电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105(pSoup) (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine(pSoup-tetR)，经pGs2质粒检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品组分：
保存与运输条件： 保存：-80℃保存，1年有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。 2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。 3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。 5） 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。 6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。 7） 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，因Ti质粒丢失的概率极低（基本可以忽略） 8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min，待其融化。
3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。
4) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5) 加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。
6) 6,000rpm离心1min，留取约 100ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。【注意：当平板只含转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48h即可；当平板中加入双元载体抗生素的同时，再加入10μg/ml利福平时，需28℃培养48-60h；当平板中加入双元载体抗生素的同时，再加入20μg/ml利福平时，需28℃培养60-72h;不建议使用超过20μg/ml的利福平用于平板或液体培养。
7) 目的克隆的液体培养： j小量摇菌：往15ml的圆底透气试管中加入1ml含对应抗生素的LB液体培养基，从新鲜培养的平板上挑1-2个单菌落接种，30℃，200rpm摇菌24-48h。 k大量摇菌：100ml透气三角瓶内加入少于20ml含对应抗生素的LB液体培养基，取小摇菌液按2%比例接菌，30℃，200rpm摇菌24-48h。
【注意】：对于农杆菌（好氧菌）来说，不论是固体平板还是液体摇菌均需要大量氧气。液体摇菌成功的关键就是要保证培养基中含足够的溶解氧，可通过以下方法来控制：j用透气试管或三角瓶；k确保营养液有大的横截面和小的厚度；l抗生素尽量少加或不加，必须添加的抗生素尽量使用低浓度。
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附表1固体和液体LB培养基配方
附表2固体和液体YEB培养基配方
附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 |
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