pTRV1 Vector  植物RNAi载体（大量液体质粒）

产品信息： 

【注意事项】：

（1） 我司提供的所有质粒（载体）仅保证质粒（载体）的关键部位测序正确，不保证实验效果。

（2） 商业化的质粒（载体）即使是开发公司也未做过完整测序。如果测序序列和原始参考序列有99%以上相同，则默认供应载体为正确载体。

（3） 我司质粒（载体）以少量干粉或液体形式提供。以干粉形式提供的质粒（载体）默认规格为2μg（不保证具体量），只保证用户能转化和扩繁到目的质粒。

背景描述

病毒诱导的基因沉默（virus induced gene silencing，VIGS）是指携带目的基因片段的病毒侵染植物后，随着病毒的复制和转录而特异性的诱导序列同源基因mRNA降解或被甲基化等修饰，从而引起植物内源基因沉默、引起表型或生理指标变化，进而根据表型变异研究目标基因的功能。VIGS是根据植物对RNA病毒防御机制发展起来的一种用以表征植物基因功能的基因转录技术，其内在的分子基础可能是转录后基因沉默(post-transcript gene silence)。

基于烟草脆裂病毒（TRV）构建的VIGS体系是目前应用最为广泛的系统。所用到的双元载体为pTRV1和pTRV2。

基本信息

质粒图谱

保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。 

运输：冰袋运输。

使用方法（供货形式：少量干粉质粒）

【注】：

①以下质粒转化方法仅做参考。实际的转化方法请根据感受态细胞来调整和优化。

②收到质粒后，务必先进行转化，挑取单克隆扩增，提取后再使用。

1）于实验前，将质粒（载体）干粉从低温取出置于室温回温至少20min。于5000rpm低速离心1min，将粉末都沉淀至管底。加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min。

2）从-80℃取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，做好标记。

3）取2μl质粒加至100μl感受态内，冰浴30min。

4）42℃热激60s，冰上静置2min，此过程不可摇动EP管。

5）加入900μl无抗生素的LB液体培养基，180rpm，37℃振荡培养45min。

6）6000rpm离心5min，仅留100μl上清混匀菌体沉淀。

7）将混匀后的菌液加到含相应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂布均匀。

8）将平板正向培养1h，再倒置培养12~16h。

9）挑取单克隆菌落到含相应抗性的LB液体培养基中，220rpm振荡培养12-16h，根据实验需要提取质粒。

【注】：如果转化平板上长的菌落过多，请将质粒按比例稀释后再转化，原则上以能挑取到单克隆为宜。如果没有菌落，则加入10μl质粒转化。请不要直接将质粒转入表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再转入表达感受态。

注意事项

1） 我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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