SURE2 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

产品组分：

菌株描述

SURE2菌株是Agilent (Stratagene) SURE菌株的高效衍生菌，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌中 “无法克隆”的某些DNA片段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE2菌株含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。

也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株适用于蓝白斑。SURE2菌株本身含卡那霉素、四环素和氯霉素特性。

SURE2菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr].

产品描述

本品是SURE2菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

5） 菌株本身含卡那霉素、四环素和氯霉素特性，携带此三种抗性的质粒不适合克隆到SURE2细胞。SURE2菌株能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml 氯霉素很敏感。

6） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

7） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

8） 要想获得大量高纯度质粒，建议在TB培养基中摇菌培养（以pUC19为例，在TB培养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产率是LB培养液的3~4倍，S.O.C培养液的~2倍）。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃取出感受态细胞，迅速插入冰中5min待其融化。

2） 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。

3） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

4） 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5） 5000rpm离心1min，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少， 

附表1固体和液体LB培养基配方

附表2固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。