目录号 | MF2396-1000UL | 售价 | 1890.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 20×50μl | 运输温度 | 干冰 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | -80℃ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 电转感受态 | 订购数量 |
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产品简介: DH5α-m Electrocompetent Cell 大肠杆菌电转感受态细胞
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菌株描述 DH5α-m是兼容DH5α和DH10B菌株优点的一款克隆菌株,在其基因组中引入mcrA、mcrBC、mrr-、hsdRMS突变,使得从外源摄入的甲基化DNA不被降解,从而利于甲基化DNA的克隆和扩繁,特别适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA,同时提高了电转效率。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15的存在使其可用于蓝、白斑筛选。
DH5α-m菌株基因型:F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA mcrA Δ(mrr- hsdRMS-mcrBC)
产品描述 本品是大肠杆菌DH5α-m菌株经特殊工艺制作所得的电击感受态细胞,只能用于DNA的电击转化,不能用于热激转化。经pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。其中,组分C(S.O.C. Medium)+4℃保存。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞最好保存在-80℃以下,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。 2) 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。 3) 加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。DNA不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时,会导致转化效率急剧下降。 4) 为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。 5) 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。 6) 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。 7) 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。 8) 对于连接产物转化:最好在转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液重悬产物,保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。 9) 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm)。避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 【准备工作】:根据每管(50μl)电击感受态需10ml S.O.C.培养基的比例,提前将适量的S.O.C.培养基置于37℃预热1-2h。 1)将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。 2)取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。加入目的DNA(质粒或连接产物),用手拨打管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 【注意】:要测定转化效率,请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。 【注意】:对于连接产物,部分公司的T4连接酶体系或重组体系不用纯化,可直接与电转感受态细胞混合后进行电击转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。 【注意】:对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用膜纯化或乙醇沉淀DNA后加入适量ddH2O重悬,然后与电击感受态细胞混合进行电击转化,需控制DNA浓度≤100ng/μl,体积≤5μl/50μl感受态细胞。 3)用200μl枪头(注意所用的枪头用剪刀剪掉0.5cm尖头)轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中,避免产生气泡,轻轻晃动使液面保持水平状态,盖上杯盖,插入冰中。 4)启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐参数来操作),将电击杯从冰中拿出,用吸水纸擦拭表面,吸干表面水渍,放入电转槽中,电击完成后,拿出电转杯放室温。 5)打开杯盖,15s内加入900 μl无抗生素的无菌S.O.C.培养基(已预热),用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次,混匀后转移到50ml离心管,向离心管内补加S.O.C.培养基定容至10ml。于37℃,225rpm振荡复苏培养1h。 6)5,000rpm离心1min收菌,重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C.平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个),用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,37℃过夜培养13~17h。 【注意】:后续若想获得大量高纯度质粒,建议在TB培养基中于37℃摇菌培养,以对照质粒pUC19为为例,在TB培养基中过夜培养的菌体浓度和质粒产量,约是LB培养基的3-4倍,约是SOB培养基的2倍。
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