目录号 | MF2495-5000UL | 售价 | 1836.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 50×100μl | 运输温度 | -80℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell | 保存温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 发根农杆菌感受态细胞 | 订购数量 |
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产品简介: Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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产品组分:
菌株描述 Lemo21(DE3)菌株是一种T7菌株,特别构建专门开发适用于困难蛋白的原核表达,包括:膜蛋白、毒性蛋白,以及具溶解性问题的蛋白。 Lemo21(DE3)不仅含BL21(DE3)的宿主特性,而且能对困难克隆进行可调控表达。这一可调控表达通过改变溶菌酶(lysY)水平来实现,溶菌酶是T7 RNA聚合酶的天然抑制剂。溶菌酶的水平(0-2,000µM)通过在表达培养物中添加L-鼠李糖来调节。当 Lemo21(DE3)在不含鼠李糖的情况下生长时,该菌株的表现与含 pLysS 的菌株相同。然而,添加鼠李糖即可调节目的蛋白的表达。对于难溶蛋白,调节表达水平有可能产生更可溶的正确折叠的蛋白。Lemo21(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于PET,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。 菌株重要特征: 1) Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失,减少对重组蛋白的降解; 2) fhuA2突变,赋予菌株产生噬菌体T1抗性; 3) pLemo质粒(具氯霉素抗性)携带由鼠李糖诱导的T7溶菌酶表达框,实现目的蛋白的可调控表达; Lemo21(DE3)菌株基因型:fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS / pLemo(CamR) 产品描述 本品是大肠杆菌Lemo21(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。 2) 最好在冰上融化感受态细胞。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。 5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。 6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。 7) 诱导时,IPTG浓度可选:0.1~2 mM。鼠李糖最佳浓度,诱导时间,温度,IPTG浓度需自行优化。 8) 对毒性大的蛋白,在转化感受态涂平板这一步应加入鼠李糖(1000 µM),以促进阳性菌落的形成,并且后面的所有步骤都应在培养基中加入鼠李糖。 9) Lemo21(DE3)菌株携带pLemo质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。 10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 1) 从-80℃冰箱取出感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。 2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB或2YT培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB或2YT固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。 【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多,可直接吸取转化产物涂布平板;若预计的克隆少,则同上离心(5,000 rpm,1min)后留取适量培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。 c)Lemo21(DE3)菌株携带 pLemo质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应同时加入34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。 相关产品
附表1 固体和液体LB培养基配方
附表2 固体和液体2-YT培养基配方
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 |