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Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
目录号 MF2495-1000UL 售价 436.00元
规格 10×100μl 运输温度 -80℃保存
其他名称 Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 保存温度 干冰运输
CAS号 N/A 有效期 1年
应用 发根农杆菌感受态细胞 订购数量
产品简介:

Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell

 大肠杆菌化学感受态细胞


产品订购: 更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-54736159 。网站:www.maokangbio.com

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2495-1000UL

Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞

10×100μl

436

MF2495-5000UL

Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞

50×100μl

1836

产品组分:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2495--1000UL

MF2495-5000UL

MF2495-A

Lemo21(DE3) Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2495-B

Control Vector puC19, 10pg/μl

10μl

10μl

菌株描述

Lemo21(DE3)菌株是一种T7菌株,特别构建专门开发适用于困难蛋白的原核表达,包括:膜蛋白、毒性蛋白,以及具溶解性问题的蛋白。

Lemo21(DE3)不仅含BL21DE3)的宿主特性,而且能对困难克隆进行可调控表达。这一可调控表达通过改变溶菌酶(lysY)水平来实现,溶菌酶是T7 RNA聚合酶的天然抑制剂。溶菌酶的水平(0-2,000µM)通过在表达培养物添加L-鼠李糖来调节。当 Lemo21DE3)在不含鼠李糖的情况下生长时,该菌株的表现与含 pLysS 的菌株相同。然而,添加鼠李糖可调节目的蛋白的表达。对于难溶蛋白,调节表达水平有可能产生更可溶的正确折叠的蛋白。Lemo21(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,适用于PETpGEXpMAL等质粒的蛋白表达。

菌株重要特征:

1) Lon OmpT 蛋白酶缺失,减少对重组蛋白的降解;

2) fhuA2突变,赋予菌株产生噬菌体T1抗性;

3) pLemo质粒(具氯霉素抗性)携带由鼠李糖诱导的T7溶菌酶表达框,实现目的蛋白的可调控表达;

Lemo21(DE3)菌株基因型:fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS / pLemo(CamR)

产品描述

品是大肠杆菌Lemo21(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率108 cfu/μg DNA且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变


保存与运输条件:

保存:-80℃保存,个月有效。

运输:干冰运输。


注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

7) 诱导时,IPTG浓度可选:0.1~2 mM。鼠李糖最佳浓度,诱导时间,温度,IPTG浓度需自行优化。

8) 对毒性大的蛋白,在转化感受态涂平板这一步应加入鼠李糖(1000 µM),以促进阳性菌落的形成,并且后面的所有步骤都应在培养基中加入鼠李糖。

9) Lemo21(DE3)菌株携带pLemo质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) -80℃冰箱取出感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB2YT培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到所选质粒筛选抗生素LB2YT固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多,可直接吸取转化产物涂布平板;若预计的克隆较少,则同上离心(5,000 rpm1min)后留取适量培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

cLemo21(DE3)菌株携带 pLemo质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应同时加入34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

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货号

名称

规格

MF2331-1000UL

BL21 (DE3) Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MF2333-1000UL

Rosetta (DE3) Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MF2334-1000UL

BL21 Star (DE3) Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MF2335-1000UL

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MS0021-10G

Chloramphenicol,  USP Grade 氯霉素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利福平

1g

MF2002-100G

IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

100g

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component

LB(液体)/

LB(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

10g

10g

酵母提取物 Yeast extract

5g

5g

氯化钠 NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

组分Component

2YT(液体)/

2YT(固体)/

胰蛋白胨 Tryptone

16g

16g

酵母提取物 Yeast extract

10g

10g

NaCl

5g

5g

1N NaOH

调整pH7.0

调整pH7.0

琼脂 Agar

/

15g

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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