目录号 | MF2297-1000UL | 售价 | 429.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | -80℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 订购数量 |
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产品简介: EPI300 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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产品组分:
菌株描述 EPI300菌株有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁,诱导液(CopyCutter Induction Solution)可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时,trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱导液(CopyCutter Induction Solution),ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。
【更多特征】: [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型,使EPI300适合于甲基化DNA的有效克隆; endA1的突变确保质粒克隆的高产量;recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性; lacZΔM15标记的存在,使EPI300适用于蓝白斑筛选; rpsL赋予EPI300链霉素抗性。 EPI300菌株基因型:F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr
产品描述 本品是大肠杆菌EPI300菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。 2) 最好在冰上融化感受态细胞。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。 6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。 7) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。 2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选,37℃培养至少15h。
【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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附表2固体和液体2-YT培养基配方
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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