Bradford Protein Quantification Kit

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

产品信息

产品描述

目前，最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白定量试剂盒（BCA Protein Assay Kit）和Bradford蛋白定量试剂盒（Bradford Protein Assay Kit）。与蛋白浓度测定的其他方法（比如：BCA法和Lowry法）相比，Bradford法更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，尤其是还原剂的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM，但本法受高浓度去垢剂的影响明显，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用BCA蛋白定量试剂盒（MP1902-500T）。

本Bradford蛋白定量试剂盒（Bradford Protein Assay Kit）的检测原理是：在酸性乙醇溶液中，考马斯亮蓝G250（Coommassie Brilliant Blue G250）与蛋白结合颜色由棕色变为蓝色，溶液的最大吸收峰从465nm迁移到595nm，颜色的变化与蛋白浓度成正比，因此，可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白浓度进行测定。本试剂盒检测速度很快，少量样品一般只需10min即可完成检测，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl，在50~1000 μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

产品组分

保存与运输方法

保存：室温保存，1年有效。蛋白标准配制成溶液后应置于-20℃保存。

运输：室温运输。

自备材料

1. 酶标仪或分光光度计、96孔板或比色杯、离心机、离心管

2. 蒸馏水、0.9% NaCl或PBS

使用方法

1. 蛋白标准品的准备

1.1 取1ml蛋白标准配制液加入到20mg蛋白标准BSA中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃长期保存。

1.2 取适量20mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml或所需浓度。例如取25μl 20mg/ml蛋白标准，加入975μl稀释液，充分混匀，即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。【特别提示】：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。但为了简便起见，一般也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可以-20℃长期保存。

2. 蛋白浓度的测定

2.1 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加标准品稀释液补足至20μl，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

2.2 加适当体积样品到96孔板或EP管中。如果样品不足20μl，加标准品稀释液补足到20μl，需注意记录样品体积。

2.3 各孔加入200μlG250染色液，室温放置3~5min。

2.4 酶标仪或分光光度计测定595nm波长处的吸光度（OD值），如无595nm，560～610nm波长范围的吸光度也可。

2.5 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线。依据标准曲线和使用样品体积计算样品的蛋白浓度。

注意事项

1） G250染色液回复至室温充分混匀后使用，有利于提高检测的灵敏度，加完G250染色液后，尽量在30min内完成吸光度的测定，防止沉淀形成后影响实验结果。

2） 蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

3） 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否则待测蛋白与蛋白标准所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

4） 建议每次测定都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

5） 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检测体积。应按比例适当加大G250染色液、样品和标准品的用量使总体积不小于最小检测体积，使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

6） 用比色杯测定蛋白含量时，由于考马斯亮蓝易结合石英比色杯，应优先选用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完毕后应立即用乙醇清洗干净。

7） 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。