| 目录号 | MM3713-50MG | 售价 | 1153.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 50mg | 运输温度 | 冰袋运输。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -20℃密封干燥保存，至少2年稳定。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | 119616-38-5 | 有效期 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 订购数量 |
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产品简介:
Sulfo-NHS-Biotin (Sulfosuccinimidyl Biotin)
搜索关键词 Sulfo-NHS-Biotin；Sulfo-NHS；NHS N-羟基琥珀酰亚胺； Sulfo-SMCC；异型双功能交联剂；NHS酯（胺基指向）；CAS NO：6066-82-6；CAS NO：119616-38-5；
产品信息
产品描述 磺基琥珀酰亚胺生物素（Sulfosuccinimidyl Biotin, Sulfo-NHS-Biotin）适用于快速、有效的标记抗体、蛋白和其它含伯胺分子。Sulfo-NHS-Biotin具水溶性、膜非渗透性两大特征，特别适用于标记细胞表面蛋白。细胞表面生物素化已成为一种重要的工具，用来研究受体和转运体的表达和调控、区分细胞质膜蛋白和定位在细胞器膜上的蛋白，以及极化上皮细胞的膜蛋白分布，等等。由于Sulfo-NHS-Biotin容易溶于极性溶液，琥珀酰亚胺环上的磺酸钠基团使其带电荷从而不能穿透细胞膜。只要细胞维持完整性，则仅有暴露在细胞表面的伯胺才能与其反应，从而将蛋白生物素化。
水不溶性版的Sulfo-NHS-Biotin是NHS-Biotin（Cat#：MM3705），是广泛使用的生物素化试剂，两者的工作原理相同，：在生理至弱碱性缓冲液（pH 7-9）中，NHS-Biotin与伯胺（-NH2）反应形成稳定的酰胺键。蛋白（包括：抗体）通常含几种可作为标记靶标的伯胺，包括赖氨酸残基的侧链和每条多肽的N末端。我司提供几种不同的生物素-NHS酯，具有不同的物理特性和臂长，包括：NHS-LC-Biotin、Sulfo-NHS-LC-Biotin。
产品特性
保存与运输方法 保存：-20℃密封干燥保存，至少2年稳定。 运输：冰袋运输。
注意事项 1） 1 Sulfo-NHS-Biotin对湿度敏感，需置于-20℃密封干燥保存。避免处理产品过程中受潮，务必开盖前将本品平衡至室温。 2） 务必于使用前在溶解粉末，由于NHS酯官能团非常容易水化，从而失去反应性。因此，不要配制用来保存的储存液，丢弃任何未用完的溶液。
3） 避免使用含伯胺的缓冲液（比如：Tris、甘氨酸），这些成分会竞争性排挤目的反应。如有必要，通过透析或脱盐的方式来更换成不含伯胺的反应缓冲液比如：PBS。
4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤（溶液内生物素化蛋白） 1. 计算 生物素标记率取决于蛋白上氨基分布、蛋白浓度和试剂用量。与高浓度蛋白参与的反应相比较，低浓度蛋白参与的反应需要更高摩尔过量的生物素试剂，以达到相同的标记水平。使用20倍摩尔过量生物素试剂来标记1-10mg/ml抗体（体积：0.5-2ml）的得率，是每个抗体上标记4-6个生物素基团。使用50倍摩尔过量生物素试剂标记50-200μg抗体（0.2-0.7ml）的得率，是每个抗体上标记1-3个生物素基团。需调整Sulfo-NHS-Biotin与蛋白的摩尔比率来获取理想的插入率。
A．计算加入反应体系所需生物素试剂（如：Sulfo-NHS-Biotin）的毫摩尔（millimoles）（20倍摩尔过量）
B．计算加入反应体系得到10mM生物素试剂（如：Sulfo-NHS-Biotin）所需的微升量（μl，microliters）
2. 生物素标记反应 2.1 从冰箱取出生物素试剂（如：Sulfo-NHS-Biotin），开盖前平衡至室温。 2.2 根据1计算所得，准备溶于PBS的蛋白溶液。 2.3 使用前，配制10mM生物素试剂（如：Sulfo-NHS-Biotin）。 2.4 加入适量体积的10mM生物素试剂（如：Sulfo-NHS-Biotin）到蛋白溶液。 2.5 冰上孵育2h或室温孵育30min。
2.6 此时蛋白标记完成，溶液内虽有过量未反应和水解的生物素试剂，但通常情况下，此时标记好的蛋白可以进行后续的ELISA或WB实验。一旦确认好标记蛋白的功能，再通过脱盐或透析的方法来纯化标记蛋白。
操作步骤（生物素化细胞表面蛋白） 1. 用预冷PBS（pH 8.0）清洗细胞三次，以去除任何含胺培养基和分泌蛋白。 2. 用PBS（pH 8.0）重悬细胞使其浓度为~25×106细胞/ml。 3. 按照1ml细胞悬液加入1mg Sulfo-NHS-Biotin（得到~2mM生物素试剂）。或，按照1ml细胞悬液加入200μl 10mM生物素试剂。 4. 室温孵育30min。【注意】：4℃孵育可能减低生物素试剂的内在化反应。 5. 用PBS（pH 8.0）+100mM甘氨酸清洗细胞三次以淬灭和去除过剩的生物素试剂和副产物。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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