| 目录号 | MX4220-1MG | 售价 | 1980.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 1mg | 运输温度 | 室温运输 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -20℃避光干燥保存 | |||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | |||||||||||||||||||||||||||||||
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产品简介: Propidium Monoazide (PMA) 叠氮溴化丙锭
重要提醒（购买或初次使用前）请务必查阅：
一、荧光染料（粉末形式，特别是对氧敏感探针）配制储存液的注意事项
1）荧光探针在固体（粉末）状态很稳定，按照说明书要求温度来保存，效期内使用即可。
2）荧光探针用有机溶剂比如：DMSO，溶解配制成储存液之后，一般来说，放到-20℃保存（2-3个月内使用，甚至更短，具体可咨询）；放到-80℃保存（6个月内使用，具体可咨询）。前提是，使用的有机溶剂必须是高质量且无水的，特别是DMSO，必须是新鲜开封。
3）配制的储存液请务必用密封性好且螺旋盖的低容量冻存管保存（不可用EP管），至少按照5-10ul/管来分装，避光冻存。
4）对于某些特殊化合物（对空气敏感或存在不稳定结构），可能保存周期特别短，甚至只能当天使用。这些化合物说明书上会有说明。
有更多信息，请联系我司工作人员来核实。
二、荧光染料（以溶于有机溶剂的储存液形式提供）的注意事项
1） 以溶于有机溶剂的储存液形式的荧光探针相对来说是比较稳定的化合物；但收到这类产品，也需用户根据单次用量（5-10ul/管来分装），-20℃以下密封避光保存，减少反复冻融次数。
2） 请务必用密封性好且螺旋盖的低容量冻存管保存（不可用EP管）。务必避光。
有更多信息，请联系我司工作人员来核实。
产品标签 Propidium Monoazide (PMA) 叠氮溴化丙锭； Ethidium Monoazide Bromide (EMA)；叠氮溴化乙锭；活力PCR； 产品信息
产品描述 叠氮溴化丙锭（Propidium Monoazide，PMA）是一种光反应的DNA结合染料，用于微生物（比如：细菌、病毒和真菌）的活力PCR（v-PCR）分析。作为一种DNA修饰剂和光反应染料，PMA高亲和结合DNA。经可见光刺激发生光裂解后，PMA共价吸附到DNA上，这一改性的DNA不能被PCR扩增。PMA染料不具细胞膜渗透性，因此，在含活死细胞的群体内，只有死细胞对DNA修饰剂敏感，由于具受损的细胞膜。PMA染料的这一特性，使其高度适合通过qPCR的手段来选择性检测活细菌（见Fig 1. PMA的作用机理）。
叠氮溴化丙锭（Propidium Monoazide，PMA）具有以下特征：①利用qPCR技术选择性检测活细胞；②死细胞特异性染料，结合到DNA上；③光活化后共价交联到DNA上；④适用于多种样本类型包括：细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞；能应用在食品和水安全和环境测试，能与qPCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术结合使用。 产品特性
1） 分子量：511 g/mol 保存与运输方法 保存：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。 运输：室温运输。 注意事项 1）荧光探针均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作 使用方法 1. 活力PCR（v-PCR）实验前考虑事项 1.1 活力PCR基于细胞膜渗透性来区分活细胞和无活力细胞。许多杀死细胞的方法都会引起受损细胞膜，从而适用于活力PCR分析。但是，某些方法比如紫外曝光，不会立即引起破损的细胞膜。文献搜索和预实验有助于确定活力PCR适用于您使用的细胞类型和处死方法。 1.2 引物选择是重要考虑因素。如果希望同时检测混合物中的所有细菌类型，靶向rRNA的引物（宽谱物种特异性）是很好的选择。如果只想检测某一种特定的细菌类型，则需设计或查找特定的引物。染料分子是随机结合DNA双链。因此，扩增子越长，染料结合到扩增子上的可能性越高。建议扩增子的长度至少100bp，扩增子越长通常得到更好的结果。 1.3 进行活力PCR实验前冰冻样本，可能损伤细胞膜，并且给出错误的阴性结果。我们发现冰冻对革兰氏阳性菌的结果影响高于革兰氏阴性菌。光照后样本可进行冰冻保存。 1.4 为了让PMA共价结合到死细胞DNA上，活力PCR需先进行光活化步骤。可以用蓝色或白色光源来刺激。总的来说，光照越强，光活化步骤越有效。非LED光，比如：卤素灯，可能会加热样品对测定产生负面影响。 1.5 PMA的作用方式有一部分是通过沉淀从样本中去除PMA-结合的DNA，因此，不同样品间每一个qPCR反应中模板DNA的量不需要归一化。取而代之的是，使用每个样本中洗出的等体积gDNA用于PCR反应。作为qPCR反应的阳性对照，1ng 纯化的gDNA足够产生良好的信号。 1.6 为了确保待测样本的PMA有效性，最好建立活细胞和死细胞对照，每个分别设置加和不加PMA组。每一组对照因PMA引起的Ct值变化（dCt）都需测定。 2. 储存液制备 将低温保存的PMA粉末置于室温回温至少20min，低速离心使粉末沉至管底。避光条件下加入98μl无菌水，充分溶解混匀，即得到20mM储存液。储存液根据单次用量分装，-20℃避光冻存，至少6个月有效。 3. 活力PCR操作方法 以下是用PMA检测细菌培养物的通用操作方法。建议首先对测试物种的活菌和死菌对照进行对照实验。对于复杂样本，比如粪便或土壤，可能需优化样本稀释、染料浓度和光处理时间。对于稀释样本，比如水样，可能在PMA处理前需对样本做过滤或浓缩处理。 3.1 用合适的培养基接种和扩增细菌（扩增体积依实验用量设置）。过夜或更长时间振荡培养，直至培养悬液OD600接近1。 3.2 （推荐）：为了制备死菌对照样本，于90℃处理5min使得细菌热失活。如果想比较活力PCR与平板培养菌活，可以在适宜的培养基平板上涂布10μl热失活的细菌，以及涂布10μl（1：100倍未处理的细菌）于另一平板上。适当条件下培养观察菌落生长情况。 3.3 取400μl细菌培养物到一干净的离心管。每一个样本，需设置一管PMA处理菌，和一管非PMA处理菌（不加染料），为了计算dCt值。 3.4 室温避光下取适量的PMA储存液到管内使其终浓度为50μM（比如：1μl 20mM储存液加入400μl菌液） 3.5 室温避光孵育10min，孵育期间可以适当指拨混匀，也可用铝箔纸包好置于摇床上孵育。 3.6 将样品曝光， 可以使用蓝色或白色光源， 不同的光源照射时间需自行摸索，使PMA与DNA充分交联。例如：可用60W的蓝光灯，照射15min。通常，光线越亮，效率越高。非LED光，比如：卤素灯，可能会加热样品对测定产生负面影响。 3.7 5000g，离心10min。 3.8 使用标准方法或商业化的试剂盒抽提基因组DNA，用于后续的qPCR实验。 3.9 选择特异性的引物来执行qPCR（关于引物选择，每一个PCR反应确保使用相同体积的洗脱DNA）。经PMA修饰的DNA会在qPCR反应中表现出扩增延迟效应。 相关产品
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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Fig 1. PMA
沪公网安备31011202021859号
