| 目录号 | MX4568-1MG | 售价 | 4233.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 1mg | 运输温度 | 冰袋 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -20℃干燥避光保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 至少1年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 钙离子探针 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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产品简介:
Rhod-5N AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针
重要提醒（购买或初次使用前）请务必查阅：
一、荧光染料（粉末形式，特别是对氧敏感探针）配制储存液的注意事项
1）荧光探针在固体（粉末）状态很稳定，按照说明书要求温度来保存，效期内使用即可。
2）荧光探针用有机溶剂比如：DMSO，溶解配制成储存液之后，一般来说，放到-20℃保存（2-3个月内使用，甚至更短，具体可咨询）；放到-80℃保存（6个月内使用，具体可咨询）。前提是，使用的有机溶剂必须是高质量且无水的，特别是DMSO，必须是新鲜开封。
3）配制的储存液请务必用密封性好且螺旋盖的低容量冻存管保存（不可用EP管），至少按照5-10ul/管来分装，避光冻存。
4）对于某些特殊化合物（对空气敏感或存在不稳定结构），可能保存周期特别短，甚至只能当天使用。这些化合物说明书上会有说明。
有更多信息，请联系我司工作人员来核实。
二、荧光染料（以溶于有机溶剂的储存液形式提供）的注意事项
1） 以溶于有机溶剂的储存液形式的荧光探针相对来说是比较稳定的化合物；但收到这类产品，也需用户根据单次用量（5-10ul/管来分装），-20℃以下密封避光保存，减少反复冻融次数。
2） 请务必用密封性好且螺旋盖的低容量冻存管保存（不可用EP管）。务必避光。
有更多信息，请联系我司工作人员来核实。
【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。
搜索关键词： Rhod-5N AM；Fluo-5N AM；Fluo-5F AM；Fluo-4, AM；可见光激发波长Ca2+荧光探针；Fluo-4；
产品信息：
基本介绍： 与其它基于BAPTA结构的指示剂相比，Rhod-5N显示出更低的钙离子亲和力（Kd=~320 µM），适用于浓度在10µM~1mM的钙离子测定。与母本Rhod-2指示剂类似，Rhod-5N在不含二价阳离子的情况下基本无荧光，一旦与钙离子结合后，呈现出显著的荧光增加，光谱基本无迁移。低亲和钙离子指示剂特别适合于具高浓度钙离子的细胞区室研究，比如：内质网，在这种区室内高亲和探针对腔室钙水平变化不敏感。 Rhod-5N AM是Rhod-5N的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-5N，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。
产品特性
1） 化学名：N-(9-(4-(bis(2-(acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)-3-(2-(2-(bis(2-(acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)
amino)-5-nitrophenoxy)ethoxy)phenyl)-6-(dimethylamino)-3H-xanthen-3-ylidene)-N-methylmethanaminium
bromide
2） 同义名：Rhod-5N, Acetoxymethyl Ester
3） 分子式：C51H56N5O11Br
4） 分子量：1154.92
5） Ex/Em（Ca2+结合）：551/576 nm
6） Kd（Ca2+结合，不含镁离子的缓冲液）：~320 µM 7） 溶解性：溶于DMSO（2~5mM） 8）化学结构式：
保存与运输方法 保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 运输：冰袋运输。
注意事项 1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。 3） Rhod-5N, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。 4） Rhod-5N, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。 5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 A， 试剂准备 1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。 2） HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2)或者其他生理缓冲液
B，操作步骤 1） 用无水DMSO溶解Rhod-5NAM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Rhod-5NAM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向1mgRhod-5NAM中加入216.4 µl无水DMSO）。准备Rhod-5NAM工作液之前，有时需要往Rhod-5NAM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。 【注①】：Rhod-5NAM染色工作液制备前，添加适量体积20% Pluronic F-127溶液到Rhod-5NAM + DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。 【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。 2） 用HHBS或其他生理缓冲液将Rhod-5NAM +DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液。 【注①】：Rhod-5NAM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。 【注②】：Rhod-5NAM工作液需现配现用，避免反复冻存。 3） 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。 【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整pH。 4） 将准备好的Rhod-5NAM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育20min-2h。 5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1 mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。 6） 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。 7） 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=551/576 nm来进行检测。
— —Written/Edited by V.
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