Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

产品关键词：

Mag-520 AM 镁离子荧光探针；Mag-Fluo-4 AM；BAPTA AM； TPEN, Heavy Metal Chelator 重金属螯合剂； FCCP；CCCP；

订购信息：

【温馨提示】：见我司（懋康生物）整理的镁离子荧光探针专题。

产品描述

目前，市场上所有的镁离子荧光探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于广受欢迎的四羧酸BAPTA钙离子螯合剂改造的三羧酸APTRA螯合剂，这类螯合剂对钙离子（Ca²⁺）的亲和性高于镁离子（Mg²⁺），通常在镁离子浓度测定的过程中造成一定的干扰：①钙离子和镁离子诱导的细胞信号通常是缠连在一起，弱选择性的镁离子探针会检测到钙离子诱导信号产生的错误结果；②生理刺激下的镁离子浓度变化往往不如钙离子显著；因此，灵敏度和选择性更高的镁离子荧光探针被期待开发。 

Mag-520正是弥补现有镁离子探针的缺陷而开发的一款新型荧光探针，能够检测浓度在0.1~10mM范围内的Mg²⁺。与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg²⁺的亲和力比Ca²⁺高10倍。Mag-520能够用常用的488nm氩激发器来激发，发射波长是525±20nm（比如：FITC滤片设置），几乎与所有常见的荧光测定仪器兼容（见附录Fig 1. Mag-520的光谱和选择性）。

Mag-520 AM是Mag-520的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Mag-520，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。体外研究表明，多种细胞系（比如：HL-60）经佛司可林（Forskolin）和FCCP/CCCP刺激产生的胞内Mg²⁺变化能即刻被Mag-520 AM检测到（见附录Fig 2）。

核心优势（选择性更高的镁离子探针，发绿色荧光，用标准FITC滤片设置或通道检测即可）

Mag-520是传统镁离子探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），具有更高的镁离子特异性，与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg²⁺的亲和力比Ca²⁺高10倍（见下图）。传统的镁离子探针虽然开发用来检测镁离子，但受结构的限制性，对Ca²⁺的亲和性高于Mg²⁺。

Fig 1. Mag-520的光谱特征和选择性。A）Mag-520（10μM）在不同Mg²⁺浓度（0-100mM）下的荧光发射光谱。光谱在50mM HEPES buffer, pH 7.7的体系内测定。B）在含Mg²⁺和Ca²⁺（浓度范围：0.005~300mM）的体系内分别用Mag-520和Mag-Fluo-4在发射波长525nm（激发：490nm）下测定的荧光强度。

产品特性

1） 同义名：Mag-520 acetoxymethyl ester

2） 分子量：579.46 g/mol

3） 外观：固体

4） 纯度：≥90%（HPLC）

5） Ex/Em：506/525 nm

6） 溶解性：溶于DMSO

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-520 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成2~5mM储存液，比如50μg Mag-520 AM（Mw：579.46 g/mol）溶于17μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完（不要超过3个月）。

2. 工作液制备

用合适的生理缓冲液或细胞培养基稀释适量Mag-520 AM母液到工作浓度，常用的2-10μM，具体的请根据自身实验需求来优化。工作液现配现用。

3. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

2.1 按需培养细胞。

2.2 用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.3 加入适量的染色工作液覆盖细胞，于37℃培养箱内孵育15~45min。加载时间和浓度需根据自身实验要求来调整。

2.4 吸走染色工作液，用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

2.5 用合适的生理缓冲液重悬细胞。

2.6 加入刺激剂处理细胞，之后监测荧光强度变化，用流式细胞仪（530/30nm滤片，FITC通道）或带FITC滤片设置的荧光显微镜。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品

——Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。