| 目录号 | MX2216-0.5KIT | 售价 | 1580.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 0.5kit | 运输温度 | 室温运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | 4℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 订购数量 |
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产品简介: CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA转染试剂盒 产品信息
产品描述 CPFect小分子RNA转染试剂盒（CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit）是一款专门开发用于小分子RNA（比如siRNA、miRNA）的转染试剂盒，含有转染所需的转染试剂，以及转染缓冲液。本品具极好的生物相容性、转染效率高、细胞毒性小。转染时无需进行培养基更换操作，特别适合各种高通量细胞筛选实验、方便、快速、高效。 试剂盒组分
保存与运输方法保存：+4℃保存，1年有效。 运输：室温运输。 注意事项 1）使用高纯的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，内毒素是影响转染效率高低的重要因素。 2）转染过程中不要添加抗生素到培养基，否则会导致细胞死亡。 3）CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（MX2216-A）应该在4℃保存，不可冻存。 4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用方法 一、准备工作 1.1 从冰箱内取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（MX2216-A）后，在漩涡振荡器中充分振荡后，室温放置，使之恢复到室温后使用。 1.2 从冰箱内取出10× CPFect Transfection Buffer（MX2216-B）后，取适量按照1：9的比例用PBS稀释到1×，混匀后待用。 二、转染方法（以24孔板内转染siRNA为例） 2.1 接种细胞 a. 贴壁细胞（以HeLa细胞为例）：转染前一天，接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到30~50%。 b. 悬浮细胞（以THP-1细胞为例）：接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中。 【注意】： 1）不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量，细胞密度需要依据细胞类型、培养时间、实验目的而定； 2）每孔接种的细胞数量尽量相同，使细胞均匀分布。 3）由于自身特性问题，悬浮细胞相对较难转染，需要优化条件以提高转染效率，如遇细胞特殊，可更换为电转方式。
2.2 转染步骤 对于每个转染样品，请按以下步骤准备： a. 稀释 siRNA：用 30μl 1×CPFect Transfection Buffer（v2）稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液（v3），轻轻混匀，室温孵育 5min。 b. 混合液制备：加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent（v4），轻轻吹打混匀，室温孵育 0～15min，制备成转染复合物。 【注意】： 1）请不要振荡，溶液可能会有浑浊，但不会影响转染； 2）混合液可室温放置一段时间，但不宜超过 24h。 c. 将 CPFect转染复合物加入到适量无双抗完全培养基（v1）中，轻轻混匀。 【注意】：CPFect转染复合物加入原细胞培养基中一般无需移除或更换。但也可依具体实验情况进行优化。 d. （可选）进行其他必要的特殊处理（如加药处理） ； e. 将培养板置于 37℃、CO2培养箱中培养24~96h（培养时间与实验目的相关）。
2.3 效果检测 转染完成后 24~72小时均可进行siRNA沉默效果检测，最佳检测时间与细胞类型，转染试剂，检测目的等相关。 1）RNA水平的检测（RNAi沉默鉴定标准）：siRNA作用的目标分子是目的基因的RNA，在RISC系统的作用下剪切目标RNA，故检测目的基因的RNA水平可直接反应siRNA是否发挥相应作用，且通过qRT-PCR可计算具体的抑制效率。一般siRNA转染后 24~72h即可检测到目的基因RNA表达明显降低。 【注意】：引物设计质量很重要，需要确保检测引物有效性。 2）蛋白水平的检测：对于蛋白编码基因，还需检测相应的蛋白表达水平，以确定是否目的蛋白也成功下调。由于蛋白表达水平的变化受多个因素影响，有时候会出现RNA水平成功抑制了而蛋白水平变化不明显的情况。若蛋白表达水平下降不明显，需认真检测其mRNA的表达水平，用来判断RNAi不理想的原因。 3）功能筛选：应用 BrdU或EdU细胞增殖，细胞凋亡等方法进行siRNA对细胞功能的直接筛选。
转染体系的调整参考用表 表I. 不同细胞培养容器转染时培养基、核酸及转染试剂用量
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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