Fluorescein Isothiocyanate Isomer I (FITC)

异硫氰酸荧光素

订购信息：优势产品（纯度≥95% HPLC），可定制更大包装，欢迎咨询：021-54736159，QQ：2971634497。

产品描述

异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate），缩写FITC，是生物学应用最广泛的一种绿色荧光素衍生物，其异硫氰酸基团能与蛋白上的氨基末端和首胺反应，从而将荧光素标记到蛋白上，包括抗体和凝集素。FITC的生物应用包括蛋白的荧光标记，蛋白的荧光示踪，以及荧光抗体的病原体快速鉴定技术。FITC的最大吸收波长为495nm，呈黄-橙色；最大发射波长为525nm，呈黄-绿色。

本品为FITC的I型异构体（Isomer I），纯度≥95%，适用于蛋白标记。

产品特性

1）CAS NO：3326-32-7

2）同义名：Fluorescein isothiocyanate isomer I; Fluorescein 5-isothiocyanate;

3）分子式：C21H11NO5S

4）分子量：389.38g/mol

5） 外观：橙色粉末

6）  纯度：≥95%（HPLC）

7）  Ex/Em：492/518 nm

8）  溶解性：溶于丙酮（1mg/ml），DMSO（5mg/ml），微溶于水（＜0.1mg/ml）

9）化学结构：

保存与运输方法

保存：2-8ºC干燥避光保存，有效期二年。

运输：室温运输。

注意事项

1）FITC有两种异构体：异构体I和异构体II，前者的异硫氰酸基团连接在苯环的C4位置，后者的异硫氰酸基团连接在苯环的C5位置，两种异构体在光谱上如波长或强度上难以区分。然而，异构体I比较容易分离和纯化，因此成本比较低，这也是为什么异构体I更普遍用于标记用的原因。FITC的两种异构体混合物适合大部分实验。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. FITC标记蛋白

1. 制备溶于0.1M碳酸钠缓冲液（pH 9.0）的待标记蛋白溶液，浓度≥2mg/ml。

【注意】：勿将碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液存放于0-5℃超过1周，因pH值会发生变化，建议现配现用。

【注意】：待标记蛋白必须是未被污染蛋白，且蛋白溶液里不能含有叠氮钠或胺类试剂，如Tris、甘氨酸，因为这些试剂会抑制标记反应。如果缓冲液里含有上述试剂，则需将该蛋白溶液在4℃于PBS，pH 7.4透析过夜；透析过程中如果pH值过高（＞8.0-8.5）会损害某些蛋白。

2）溶解FITC于无水DMSO配制成1mg/ml的溶液。

【注意】：建议于每次标记实验前新鲜配置FITC溶液，避光保存。

3）对于1ml蛋白溶液加入50µlFITC溶液，可按照每次5µl的量边加边轻轻搅拌蛋白溶液；

4）待所需FITC加入完毕，将反应液于4℃避光孵育8h；

5）加入NH4Cl使其终浓度至50mM，4℃终止反应2h；

6）加入二甲苯青至浓度0.1%，甘油至浓度5%；            

7）通过大小孔径合适的凝胶过滤层析分离排除未被结合的FITC，分离范围在20,000至50,000（球蛋白例如抗体）。待凝胶柱平衡后，将以上反应混合液从柱顶注入，打开凝胶柱，待其全部流入柱床后，加入PBS缓冲液。

此时，可以形成两条带：a，快速移动带，也就是FITC-蛋白标记物，先被洗脱，通常于室内光下可看到；b，慢速移动带，也就是未结合蛋白的FITC和二甲苯青。仅仅在PBS缓冲液清洗后被洗脱出来。

8）于4℃避光储存上述偶联物，加入0.1%（w/v）叠氮化钠作为一种防腐剂。若蛋白浓度较低（＜1mg/ml），可加入1%BSA作为一种蛋白稳定剂。

9）标记物中荧光素和蛋白的比值（F/P）可通过测定495nm和280nm处的吸光值来鉴定，F/P应位于0.3-1.0。小于该比例则信号太低，高于该比例则背景太高。

2.荧光素/蛋白摩尔比（F/P）的测定

F/P摩尔比即蛋白荧光标记物中FITC与蛋白质的摩尔比。为了计算该值，首先需测定该标记物在280nm和495nm的吸光值：将已标记蛋白样品置于石英比色皿中，测得A280和A495，注意A280的值需在0.2-1.4之间，如在该范围外，需调整相应标记样品浓度。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。