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Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Saccharomyces cerevisiae 酵母转化试剂盒(用于酿酒酵母)
目录号 MF2503-200T 售价 1700.00元
规格 200T 运输温度 冰袋
其他名称 Yeast Transformation Kit 酿酒酵母转化试剂盒 保存温度 见说明书
CAS号 N/A 有效期 1年
应用 酵母感受态细胞制备和转化试剂盒 订购数量
产品简介:

Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Saccharomyces cerevisiae

酵母转化试剂盒(用于酿酒酵母)


产品信息

产品名称

产品编号            

规格                

价格(元)        

Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Saccharomyces cerevisiae    

酵母转化试剂盒(用于酿酒酵母)

MF2503-200T

200T

1700

【温馨提示】:见我司懋康生物整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay)产品专题。


产品描述

本酵母转化试剂盒(Yeast Transformation Kit)是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒,操作简单快捷,能用于多个质粒的共同转化。本试剂盒提供了完整的酵母感受态制备、储存以及转化试剂,每个试剂盒可做200次质粒的转化。


产品组分

组分编号        

组分名称

规格             

MF2503-A 

Preparation Solution 制备液               

100ml

MF2503-B

Storage Solution 冻存液

10ml

MF2503-C

Transformation Solution 转化液

70ml


保存与运输方法

保存:4ºC保存,1年有效。

运输:冰袋运输。


注意事项

  1. 酵母转化整个过程请无菌操作。

  2. 使用高纯的质粒有助于提高转化效率。

  3. 本品适用于酿酒酵母的转化。

  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

一、酵母感受态细胞的制备

    1. 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线,30℃培养2-4天以活化菌种。

    2. 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线,30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时,接种。

    3. 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基,30℃培养过夜。

    4. 第二天转接到含30-50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,直至OD600达到0.4-0.5范围。1000g离心5min收集细胞,去上清。

    5. 用30-50ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。1000g离心5min,去上清。

      【注意】:若想节省准备时间,也可直接使用一周内的酵母培养产物(4℃保存),取3ml接种到50mlYPDA液体培养基过夜摇菌。之后离心收集细胞,用于下游实验。

    6. 用10ml制备液重悬和洗涤沉淀,1000g离心5min,去上清。

    7. 用0.5-1.0ml冻存液重悬沉淀,此时,即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl分装到1.5-2ml无菌冻存管内,或直接转化,或进行冻存。

    8. 按照缓慢冷冻的方法:①将感受态放入程序降温盒内,再放到-80℃冰箱过夜,之后取出置于-80℃保存;②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内,再放于-80℃冰箱过夜,之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。

      【注意】:缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。


二、酵母转化

2.1 按照以下体系制备转化用混合液,每个转化反应需360μl的混合液。

转化液

350 μl

质粒(~ 200 ng/μl)

5-10 μl(根据质粒的浓度加入相应的体积)

总体积

用无菌去离子水定容到360μl

    1. 取360μl转化混合液加入上述制备好的感受态细胞,用枪轻轻反复吹吸菌体,使得管底的酵母细胞充分悬浮。

    2. 置于30℃水浴锅孵育40-60min,每10min轻轻混匀一次。对于一些菌种,延长孵育时间能提高转化效率,控制在3h之内。

    3. 3000g离心3min,去掉上清液。

    4. 【推荐】用0.5ml YPD Plus(MS6309-50ML)重悬沉淀,30℃摇床振荡培养30-60min。1000g离心5min,去掉上清液。

    5. 往沉淀内加入400μl无菌去离子水,重新悬浮沉淀。稀释10倍、100倍后分别转移到相应的酵母培养平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,30℃培养3-5天直至出现酵母克隆。


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货号

名称

规格                

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

 

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