EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

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产品关键词

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亚胺；Carboxyl activating agent 羧基活化剂；Peptide synthesis 多肽合成；CAS：25952-53-8；

产品信息

产品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一种水溶性碳二亚胺衍生物，用于偶联半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用来修饰NMDA受体，以及肽合成中用作一种缩合剂。

EDC HCl是一种零长度交联剂，用来偶联羧基到伯胺上。这一交联剂应用非常广泛，比如：肽合成中形成酰胺键，连接半抗原到载体蛋白上形成免疫原，通过5'磷酸基团标记核酸，制备生物分子具胺反应指向的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS Ester）。

EDC首先与羧基反应产生一个具胺反应性的O-酰基异脲中间体，如果这一中间体未碰到胺，会水解再生成羧基。当体系内含N-羟基硫代琥珀酰亚胺（sulfo-NHS），EDC能将羧基转化成具胺反应性的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯（sulfo-NHS ester）。这一步只需将EDC与含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

产品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同义名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同义名：EDC盐酸盐；EDAC 盐酸盐；WSC 盐酸盐；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   纯度：≥98%

7）   外观：白色至灰白色粉末

8）   溶解性：溶于水

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤【仅做参考】

一、  用EDC将半抗原偶联到载体蛋白上

1.1   所需材料

载体蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或钥孔血蓝蛋白（KLH）

共轭缓冲液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

离心脱盐柱或其他具5~6k截留分子量的凝胶过滤柱

1.2   偶联步骤

1）   将EDC平衡至室温；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共轭缓冲液；

3）   在500μl共轭缓冲液中溶解高达2mg的肽或半抗原，并将其加入200μl载体蛋白溶液中。

4）   对于BSA或OVA偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加100μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。对于KLH偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加50μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。如果出现沉淀，之后减少EDC用量。

5）   室温反应2h。

6）   使用脱盐柱纯化偶联物。如果需将免疫原储存数日，需过滤除菌，并在4℃或-20℃下保存于无菌管内。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）两步法偶联蛋白

【注意】以下步骤引用自Grabarek and Gergely，能够顺序偶联两个蛋白，并且不会影响第二个蛋白的羧基。此步骤需含巯基化合物淬灭第一个反应。

【注意】EDC与Sulfo-NHS的活化反应在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子与伯胺的反应在pH 7~8最有效。为了得到最佳结果，第一步反应在pH 5~6的MES缓冲液（或其他非胺非羧酸盐缓冲液）内进行，之后用磷酸盐缓冲液（或其他非胺缓冲液）提高pH到7.2~7.5，立即进行与伯胺分子的反应。为了淬灭第一步反应，使用2-ME或通过脱盐柱进行缓冲液交换，可以简单的除去过量试剂。

2.1   所需材料

活化缓冲液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶联缓冲液：磷酸盐（PBS），100mM 磷酸钠，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制备于活化缓冲液（1mg/ml）

蛋白2：制备于偶联缓冲液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可选】脱盐柱或其他凝胶柱

羟胺盐酸

2.2   偶联步骤

1）   开瓶前将EDC和NHS平衡至室温。

2）   向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室温下反应15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（终浓度为20 mM）以淬灭EDC。

4）   【可选】：使用已经用偶联缓冲液（PBS）平衡的脱盐柱将蛋白质与过量的还原剂和灭活的交联剂分开。

5）   将蛋白2以与蛋白质1等摩尔比加入活化的蛋白中。室温反应2h。

6）   为了淬灭反应，加入羟胺至终浓度为10 mM。此方法水解蛋白1上未反应的NHS，生成异羟肟酸。

7）   使用脱盐柱除去过量的淬灭剂。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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