Quin-2 AM, Cell Permeant 

钙离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

搜索关键词：

Quin-2 AM,；Fura-2, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针，超级纯；EGTA AM；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：83104-85-2；

产品信息：

基本介绍：

钙离子测定在各种生理活动中发挥着重要作用，与钙离子结合从而表现出光谱反应的荧光探针使得研究人员能够观察胞内游离钙离子水平变化，通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光度计和荧光酶标板来检测。

Quin-2是第一代膜非渗透性的高亲和钙离子荧光探针（Kd=115nM, Ca2+），对钙离子的选择性高，不会受到钠离子梯度、膜电位或胞内pH干扰。像Quin-2的高亲和探针适合用于监测低水平钙离子，比如：静息细胞。细胞内加载高达2mM的Quin-2未发现严重的探针毒性效应，因此，Quin-2可能适用于缓冲胞内钙瞬态。Quin-2与钙离子结合后，紫外吸收和荧光光谱发生明显迁移，荧光产率提高约20倍。Quin-2模拟钙螯合剂EGTA的结构而设计，与镁离子相比，能更紧密的结合钙离子。Quin-2不具膜渗透性，可通过显微注射、电转或划痕负载的方式进入胞内。与Fura-2、Indo-1、Fluo-3和Fluo-4相比，Quin-2具更低的吸收和光量子产率，因此，需要更高的加载浓度。最大波长（Ca2+-bound）：激发：339nm；发射：492nm[1-2]。

Quin-2 AM（Quin-2 acetoxymethyl ester）是乙酰氧基甲酯形式的Quin-2，具细胞膜渗透性，能主动扩散进入胞内。一旦进入细胞，被胞内酯酶水解生成Quin-2，保留在胞内。

产品特性

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3） Quin-2 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4） Quin-2 AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1） 用无水DMSO溶解Quin-2 AM配制成10mM或其它适宜浓度的储存液，或将已配好的Quin-2 AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成10mM的母液，需向1mgQuin-2 AM中加入120.5µl无水DMSO充分溶解，混匀即可）。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将Quin-2 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20µM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Quin-2 AM+DMSO储存液，使Pluronic F-127的浓度约为0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

【注②】：Quin-2 AM的适宜使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注③】：Quin-2 AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液内（在孔内的最终浓度为0.5-1mM），以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：我司提供多种丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（MZ8472-154MG），能降低有机溶剂的使用。

4） 加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37℃孵育30-60min。

【注①】：某些细胞系探针的加载时间长于1h能提供更好的信号。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

应用示例

Ref 1）Suc I, Escargueil-Blanc I, Troly M, Salvayre R, Nègre-Salvayre A. HDL and ApoA prevent cell death of endothelial cells induced by oxidized LDL. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1997 Oct;17(10):2158-66. doi: 10.1161/01.atv.17.10.2158. PMID: 9351385

实验方法（Determination of Cytosolic [Ca2+]）：[Ca2+]i was determined according to the methods Arslan et al38 and Grynkiewicz et al,39 by using the permeant Ca2+ probesquin 2-AM or fura 2-AM, which are hydrolyzed by intracellular carboxylesterases to liberate quin 2 or fura 2.Briefly, cells were incubated for 15 minutes at 37°C in DMEM buffered with 20 mmol/L HEPES and containing 0.5% BSA and quin 2-AM (20 μmol/L) or fura 2-AM (5 μmol/L). After dilution and incubation in DMEM for 45 minutes, cells were washed twice in phosphate buffered saline and their fluorescence was recorded. With quin 2 (excitation 340 nm, emission 395 nm), the calibration was done in very low and high Ca2+ to calculate the absolute value of [Ca2+]i, as described by Arslan et al.38 With fura 2, [Ca2+]i determination was performed at the dual excitation wavelength of 340 and 380 nm and emission at 510 nm. [Ca2+]i was calculated by the ratio method of Grynkiewicz et al.39 Both fluorescent Ca2+ probes gave quite similar results; therefore, to avoid redundant data, we report only results obtained with one probe.

参考文献

[1] Tsien, R.Y., Pozzan, T., and Rink.T.J. Calcium homeostasis in intact lymphocytes: cytoplasmic free calcium monitored with a new, intracellularly trapped fluorescent indicator. J. Cell. Biol. 947(2), 325-334 (1982).

[2] Minta, A., Kao, J.P., and Tsien, R.Y. Fluorescent indicators for cytosolic calcium based on rhodamine and fluorescein chromophores. J. Biol. Chem. 264(14), 8171-8178 (1989).

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