活性氧ROS探针之：Life CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化应激检测试剂

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时间：2018-09-18 作者：懋康原创文章来源：懋康生物

活性氧（reactive oxygen species, ROS）荧光探针系列之：

CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化应激检测试剂

背景需求：

氧化应激是由于反应性活性氧物质ROS产生和细胞清除ROS的不平衡导致的，ROS与核酸、蛋白质和脂质反应导致细胞和组织损伤。ROS的过多累积往往引起某些疾病的发生，包括炎症、动脉粥样硬化、衰老以及衰老相关的退行性疾病等。为此，ROS产生及其治病机理的研究越来越受到科学家的关注。

基本介绍：

CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）是专门设计用来可靠检测活细胞内活性氧ROS的一系列荧光探针。这些细胞膜渗透性的试剂当处于还原态时无荧光或极弱荧光，一旦被氧化后发出强荧光。

Thermo Fisher (Invitrogen)提供三种CellROX氧化应激试剂，CellROX Green Reagent是一种DNA染料，一旦氧化后与DNA结合，因此，信号主要定位在细胞核和线粒体。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的荧光信号定位在细胞质。CellROX氧化应激试剂产生的荧光皆可用传统的荧光显微镜、高内涵筛选仪器（HCS）、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛选（HTS）。还与各种台式仪器兼容，比如FLoid™，Tali™，和Attune™仪器。

产品优势：

CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下优势：

◇ 染色流程非常简单（见Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程图），试剂直接加入完全培养基或缓冲液内的细胞。

◇ 与传统的ROS检测探针相比，光稳定性非常好。另外，某些CellROX氧化应激试剂经后期的甲醛固定和去污剂透化处理后，仍维持良好的荧光信号（见Table 1. ROS检测方法的比较表）。

	CellROX Deep Red Reagent	CellROX Orange Reagent	CellROX Green Reagent	DCFH-DA	DHE
Readout	CellROX探针本身是还原态，无荧光，一旦氧化后发亮绿色、橘色或深红色荧光。CellROX具细胞膜渗透性，能轻松加载进入活细胞。			本身无荧光，氧化后发强绿色荧光。具细胞膜渗透性。	本身蓝色荧光，进入细胞氧化后，与DNA结合生成红色荧光。
Common filter set	Cy5	RFP	FITC	FITC	Suitable filter
Ex/Em (nm)	640/665	545/565	485/520	504/529	518/606
Live cell–compatible	Yes	Yes	Yes	Yes	Yes
Labeling in complete medium	Yes	Yes	Yes	No	Yes
Formaldehyde-fixable	Yes	No	Yes	No	No
Detergent-resistant	No	No	Yes	No	No
Compatible platforms	Imaging HCS HTS Flow cytometry *Attune Acoustic Focusing Cytometer	Imaging HCS Flow cytometry Tali image-based cytometer	Imaging HCS Flow cytometry Tali image-based cytometer Floid cell imaging station Attune Acoustic Focusing Cytometer	Imaging HCS HTS Flow cytometry *Floid cell imaging station	Imaging HCS

◇ 通过对内皮细胞维生素K3诱导的ROS生成的抑制实验，发现CellROX氧化应激试剂特异性检测ROS（见Fig 2 基于CellROX氧化应激试剂定量和统计分析氧化应激水平）。

A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光共聚焦专用玻底培养皿内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。向某些对照和维生素K3处理孔内加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50µM）。之后细胞用CellROX Green Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置显微镜下检测（40X物镜）。N-乙酰半胱氨酸处理抑制TBHP诱导生成的ROS，证实CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。

B）CellROX Orange Reagent. 在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含TBHP（200µM）或不含TBHP的培养基37℃处理2h。向某些对照和TBHP处理孔内加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10µM）。之后细胞用CellROX Orange Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP诱导产生的ROS，证明CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。

C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。在孵育的后30min向某些对照和维生素K3处理孔内加入超氧化物清除剂MnTBAP（100µM）。之后细胞用CellROX Deep Red Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。

◇ CellROX氧化应激试剂能偶与其他细胞活力检测探针联合检测，是一种非常有用的多重荧光方法来测定大量的细胞现象（见Fig 3 人U2-OS细胞的氧化应激检测）。

Fig 3. 表达Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤细胞（U2-OS）用维生素K3(Menadione, 100µM)处理1h。之后用CellROX Green Reagent（5µM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。细胞清洗后置于活细胞成像液内检测。

CellROX订购信息：以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装正品，原始包装为10x50 µg（10支50µg单个包装构成）。我司对C10444、C10422进行拆开销售，特惠价为2180元/支，单支50µl，现货销售，欢迎订购。

货号	产品名称	规格	报价（元）	小包装供货
C10422	CellROX Deep Red Reagent 氧化应激探针（深红色）	5 x 50 uL	7156	是（50 µl）
C10443	CellROX Orange Reagent 氧化应激探针（橙色）	5 x 50 uL	7214	否（50 µl）
C10444	CellROX Green Reagent 氧化应激探针（绿色）	5 x 50 uL	7175	是（50 µl）

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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