BL21系列感受态细胞常见问题
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Part 1、BL21/BL21（DE3）/ BL21 (DE3) pLysS感受态细胞
一、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型
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宿主菌Host Strain |
基因型Genotype |
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BL21 strain |
E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm |
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BL21 (DE3) strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR) |
基因型说明：
a）以上三个宿主菌都是大肠杆菌E. Coli. B/r菌株，不含lon蛋白酶，也缺乏外膜蛋白酶OmpT。这两个关键蛋白酶的缺乏降低菌株内表达外源蛋白的降解率。
b）DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（DE3 lysogen）（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。
c）pLysS命名表明该菌株携带pLysS质粒，含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，从而能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒赋予菌株氯霉素抗性（CamR），而且含有p15A复制起始子，这一起始子使该菌株兼容于含ColE1或pMB1复制起始子的质粒（比如pUC或pBR322来源的质粒）。
二、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的应用特征
BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS三种宿主菌内T7启动子表达载体（比如pCAL, pET载体）呈现不同的蛋白表达水平。BL21（DE3）感受态细胞是全能型菌株，满足高水平蛋白表达且容易诱导。BL21 (DE3) pLysS感受态更严格控制毒性蛋白表达且具氯霉素抗性。
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表达宿主 |
诱导方法 |
优点 |
缺点 |
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BL21 |
λ噬菌体CE6感染 |
最严格控制背景表达（非诱导表达） |
诱导不如DE3衍生菌有效；诱导（感染）过程更冗长 |
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BL21 (DE3) |
IPTG诱导lacUV5启动子驱动的T7聚合酶 |
高水平表达 |
T7聚合酶泄露表达，引起潜在毒性蛋白的背景表达（非诱导表达） |
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BL21 (DE3) pLysS |
IPTG诱导的T7聚合酶 |
容易诱导 |
与BL21 (DE3)相比，稍微抑制诱导表达 |
三、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的异源蛋白表达特征
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表达宿主 |
异源蛋白（Heterologous protein）表达特征 |
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BL21 strain |
非毒性蛋白的高水平表达，不能用于T7启动子驱动的蛋白表达（如pET） |
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BL21 (DE3) strain |
非毒性蛋白的高水平表达，用于T7启动子驱动的蛋白表达（如pET） |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
非毒性和毒性蛋白的高水平表达，背景表达低于BL21 (DE3)，BL21 |
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格（元） |
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10×100μl |
280 |
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MF2331-5000UL |
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞 |
50×100μl |
1280 |
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10×100μl |
280 |
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50×100μl |
1280 |
