【温馨提示】：
见我司懋康生物整理的酵母双杂交检测（Yeast two-hybrid assay）产品专题。
基本描述
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™（酵母转化试剂盒）是一款专门设计用于酵母转化和文库筛选的试剂盒，比目前商业或公开的文献方法更快捷和更有效。本试剂盒制备的酵母细胞可立即用于转化或冻存待用（≤ -70°C）。本试剂盒制备的细胞适用于环形和线性DNAs转化，同时也能用于其他真菌包括C. albicans，S. pombe和P. pastoris的转化。
产品亮点：
~ 高转化效率：每µg质粒DNA（环形）可产生105- 106个酵母转化子；
~ 制备好的感受态细胞可冻存后待用；
~ 快速简单步骤于10min内可制备酵母感受态细胞；
~ 简单单一步骤，1h内完成转化；
~ 适用菌株类型广（S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris）；
~ 简单方法用于多质粒转化；
产品组分：本试剂盒可做120个常规转化或600个微量转化实验。试剂盒4℃一年有效。
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组分 |
规格 |
保存 |
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EZ1 Solution |
60ml |
0-4℃ |
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EZ2 Solution |
6ml |
0-4℃ |
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EZ3 Solution |
60ml |
0-4℃ |
操作流程【见下图】：
A. 感受态细胞制备
30℃，于10ml YPD肉汤培养酵母菌直至中数量级（~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0）。以下步骤室温进行。
A1，500 x g离心细胞4min，吸掉上清液；
A2，加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新离心沉淀细胞，吸掉上清液；
A3，加入1ml EZ2溶液重悬沉淀细胞。
此时获得的感受态细胞即可直接用于转化或冻存备用（≤ -70°C）。注意需缓慢冻存细胞，不可使用液氮瞬间冻存细胞。
B. 转化
以下步骤适用于新鲜制备和冻存（室温融化）的酵母感受态细胞。
B1，取50µl感受态细胞与0.2-1µg DNA（体积少于5µl）混合；加入500µl EZ3溶液，完全混合；
B2，30°C孵育45min，孵育过程中用手指轻弹或低速涡旋（如果适用于转化DNA）2-3次让其混匀；
B3，从上面转化混合液中取50-150µl到适当平板上，没有必要沉淀或清洗细胞。、
B4，30°C孵育平板2-4天使得转化子生长。
订购信息：Zymo Research原装正品，现货供应。欢迎来电咨询，021-54736159，QQ：2971634497。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格（元） |
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T2001 |
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™（酵母转化试剂盒） |
120 Rxns |
1532 |
T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ User Manual
常见问题（FAQs）：
1. 试剂盒内含什么及工作原理？
答复：试剂盒所用步骤是特别设计，某些步骤，类似于基于锂阳离子的方法，不需要原生质体制备。作用机制可能涉及一些代谢通路，但并未完全清晰。
2. 试剂盒是否适用于C. albicans，S. pombe，或Pichia pastoris？
答复：根据Zymo实验室内部数据，适合以上菌株感受态细胞制备和转化。
3. 感受态细胞≤ -70°C能存放多久？感受态细胞的融化方法？
答复：感受态细胞≤ -70°C保存半年转化效率不会有损失，超过半年效率开始逐渐降低。
4. 感受态细胞的反复冻融会影响转化效率？
答复：室温融化。
5. 限制性内切酶处理的质粒是否不经纯化就能直接转化？
答复：是的。不同的内切酶消化缓冲液对转化效率影响微弱。每个转化实验将DNA体积调整到5µl。
6. 是否需要使用含山梨醇的平板？
答复：不需要。任何平板都适合本转化实验。
7. 是否添加载体DNA？
答复：不需要添加载体DNA。
引用文献（Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™）：
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Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species. |
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The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength. |
— — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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