Benzonase Nuclease 全能核酸酶/广谱核酸酶
（酵母重组表达，无细菌内毒素残留，无蛋白酶污染）
【公告】：应客户和市场需求，我司在供应真核表达无内毒素残留全能核酸酶（#MP1509）的基础上，新增两款原核表达普通科研级别的全能核酸酶，一款是不带标签的全能核酸酶（#MP1510），一款是带Strep Tag II标签的全能核酸酶（#MP1511），新增产品适用于对内毒素水平无特别要求的实验。
产品关键词：
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（广谱核酸酶）；粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen）；非特异性核酸内切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；
基本描述：
Benzonase，中文名全能核酸酶，或广谱核酸酶，一种源于粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又称为灵杆菌）的非特异性核酸内切酶，由两个完全一样的亚基构成，每个亚基大约30kDa，含有245个氨基酸和两个必需的二硫键。可以切割和降解各种形式的DNA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效。对核酸碱基序列无特异性要求，可在链内任意核苷酸间进行切割，广泛用于去除生物制品中的核酸。
主要应用：
1、科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的首选酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究；
需求背景：进行重组蛋白纯化或者天然蛋白提取研究中，第一步就需要用细胞/组织裂解液如RIPA对其进行裂解释放蛋白，此时往往伴随着大量的基因组DNA被释放出来，很多并不是独立存在的，往往与核蛋白以复合物的形式存在，导致提取物非常粘稠，呈鼻涕状。蛋白提取过程中若不能很好处理这些粘稠基因组，会造成蛋白提取效率的降低极核蛋白的丢失。传统方法有采用超声处理，DNase/RNase消化来降低或消除核酸影响，但由于操作的非标准化，通常难以评估此核酸清除步骤的有效性和数据稳定性。
此时，若在加裂解液的同时加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶（广谱核酸酶），可以很好的清除粗提物中的核酸，有效降低粘度【见图1】，提高后续操作的效率。
图1、细胞裂解液经Benonase处理和未处理的比较图。左管是仅加RIPA裂解液所得的离心产物，可看到鼻涕状粘稠物悬浮在管中；右管事加RIPA裂解液和Benonase共同处理所得的离心产物，可看到上清非常透明。
2、用在生化分析样品制备— — ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程，使用本品benonase处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，以及提高回收率。
3、疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主核酸残留，使得疫苗和蛋白类核酸污染显著降低至皮克级别，提供生物功效。
4、防止细胞凝聚（Cell clumping），特别是融化冻存的细胞样品时；
应用优势：Benonase不仅无蛋白酶活性，而且不会对健康细胞的生长造成干扰。
应用背景：全血来源的外周血单个核细胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的应用价值，比如，定量疫苗诱导的T细胞反应。T细胞反应实验最初要求新鲜分离的细胞从而达到最佳的检测信号，这给大规模的实验中对样本处理提出严格的操作限制。然而，冻存PBMCs（尤其是从冻存血液中分离出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影响后续的分析。
应用示例：Smith JG et al.研究显示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化缓冲液中有效预防细胞凝聚，从而使得PBMC冷冻保存的应用成为可能。【文献来源：Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
产品优势：
1、酵母重组表达，无细菌内毒素残留。【大部分商业化的Benonase都是大肠杆菌重组表达，由于自身菌株特性，不管纯化方法如何，或多或少都会受细菌内毒素影响。】
2、无蛋白酶残留，不会对蛋白本身造成干扰，影响测试结果准确性。
3、比活力高≥1.0×106U/mg蛋白【活性单位定义：在37℃，pH8.0反应条件，2.625ml反应体系中，30min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）】
4、提供两种纯度的产品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者满足最基本的科研应用，价格更经济实惠；后者满足生物制品要求。
5、酶活性值：≥250 U/μL。对于小体积制备物，可用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀释到一定浓度，再加入体系中。稀释后溶液可4℃保存几天维持稳定。
6、液体酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
产品使用：
本品为即用型溶液，可根据终浓度直接加入反应体系，或稀释到一个中间浓度后直接加入反应体系【稀释方法，见FAQs】。对于不同的应用，酶使用量有所差别，建议用量参考下表，具体实验请做优化调整。
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实际应用 |
建议工作浓度 |
工作条件* |
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常规蛋白纯化 |
25U/ml |
37℃30-60min |
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核蛋白纯化 |
100U/ml |
37℃10min；4℃30min； |
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病毒纯化 |
12.5U/ml |
37℃30min |
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【*】Benzonase Nuclease的有效工作温度是0-42°C，最佳工作温度是37℃。低温使用酶活性有所降低，可通过 多添加2-5倍Benzonase Nuclease或延长消化时间（2-3h）来进行活力补偿。 |
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产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159。QQ：2971634497。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
CAS NO. |
价格（元） |
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MP1509-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
25KU |
9025-65-4 |
400 |
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MP1509-50KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
50KU |
9025-65-4 |
720 |
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MP1509-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
100KU |
9025-65-4 |
1380 |
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MP1510-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含标签） |
25KU |
9025-65-4 |
350 |
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MP1510-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含标签） |
100KU |
9025-65-4 |
1180 |
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MP1511-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（带Strep标签） |
25KU |
9025-65-4 |
600 |
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MP1511-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（带Strep标签） |
100KU |
9025-65-4 |
1800 |
【产品选择指导】：
1） 不需带标签的全能核酸酶，且对内毒素水平要求不高（比如做蛋白结晶实验），请选择Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含标签）（#MP1510），价格最经济。
2） 若需带标签的全能核酸酶，可选择带Strep标签的全能核酸酶（货号：MP1511-25KU）或带His标签的全能核酸酶（货号：MP1509-25KU）。前者满足对内毒素水平要求不高的实验，后者适用于要求无内毒素的实验。
3） 若需不含内毒素污染的全能核酸酶，请选择真核重组表达的全能核酸酶（货号：MP1509-25KU）。
我司提供的Benzonase，比Merck、Sigma同等类型的产品性价比高很多，且基本有现货，见下：
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品牌/名称 |
货号 |
规格 |
浓度 |
价格（元） |
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Merck（Benzonase Nuclease,纯度>90%，E. Coli） |
70746-3 |
10KU |
25 U/μL |
1835 |
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Merck（Benzonase Nuclease,纯度>90%，E. Coli） |
71205-3 |
25KU |
250 U/μL |
2828 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,纯度>90%，E. Coli） |
E1014 |
5KU |
≥250 U/μL |
743 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,纯度>90%，E. Coli） |
E1014 |
25KU |
≥250 U/μL |
2629 |
【注】：Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
相关产品：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159。QQ：2971634497。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格（元） |
货期 |
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MP1501-100ML |
100ml |
225 |
现货 |
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MP1502-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中） |
100ml |
225 |
现货 |
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MP1503-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） |
100ml |
225 |
现货 |
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MP1504-100ML |
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 |
100ml |
225 |
现货 |
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MP1505-100ML |
NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液 |
100ml |
225 |
现货 |
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MP1506-100ML |
SDS Lysis Buffer SDS裂解液 |
100ml |
225 |
现货 |
常见问题（FAQs）：
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问1：在实验的哪一步加入Benzonase全能核酸酶？ 答1：根据具体应用有所变化，但是总的原则是，在发酵步骤之后和蛋白收集之前加入Benzonase。 |
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问2：如何稀释Benzonase全能核酸酶？ 答2：一般建议按照1:1000-1:20000来稀释，具体根据实际应用浓度、反应体系、反应温度、作用时间等参数来灵活变动。使用稀释缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl来稀释，4℃保存几天稳定。最好现配现用。或使用贮存缓冲液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl, 50%甘油来稀释到一个中间浓度，-20℃保存长期稳定。 |
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问3：Benzonase全能核酸酶是否无蛋白酶活性？ 答3：本品未检测到蛋白酶活性，因此使用过程中不会被降解。但是样品自身含有的蛋白酶可能会对本品造成不可逆的降解。 |
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问4：Benzonase全能核酸酶是否安全？ 答4：内部毒性测试数据，单次注射小鼠和大鼠：发现在很高浓度下都没有毒性效应。另，极高浓度静脉注射小鼠未观察到致突变性。 |
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问5：为什么Benzonase全能核酸酶不工作？什么会抑制其活性？ 答5：在宽广的作用条件下Benzonase都具有活性【见下表】，然而，1-2mM Mg2+对酶活性维持是十分必要的。Mn2+可替代Mg2+，但Benzonase只有在Mg2+存在下才能达到最佳工作活性。当单价阳离子浓度＞300mM，磷酸盐浓度＞100mM，硫酸铵浓度＞100mM的情况下，酶活性被抑制约50%。另外，＞1mM EDTA也会抑制酶活性。
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问6：发现Benzonase全能核酸酶活性丧失，为什么？ 答6：Benzonase通常很稳定，但是某些稀少情况会发生活力损失。有几种可能原因：由于样品中变性剂比如蛋白酶的存在或不正确保存方法引起的不可逆酶活性丧失；由于螯合剂如EDTA存在引起可逆失活，因其去除维持酶活必须的Mg2+。 |
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问7：一不小心将Benzonase全能核酸酶置于工作台上整周，是否能继续使用？ 答7：Benzonase稳定性测试显示其十分稳定。25°C（湿度60%）保存数周酶活性不受影响。 |
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问8：如何抑制Benzonase全能核酸酶活性？ 答8：操作体系中添加剂/试剂都有可能影响Benzonase活性——比如，高盐（单价阳离子浓度＞300mM，磷酸盐浓度＞100mM，硫酸铵浓度＞100mM）。其他已知抑制剂如螯合剂EDTA，导致Mg2+损失（EDTA＞1mM即可抑制酶活性），这一抑制可通过添加MgCl2来解除。 |
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问9：如何去除体系中的Benzonase全能核酸酶？ 答9：通过以下几种下游的操作方法来去去除，比如澄清用的深度过滤法；TFF (Tangential flow filtration)；色谱纯化（IEX, SEC, HIC）等。 |
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问10：Benzonase全能核酸酶与蛋白酶抑制剂cocktail兼容吗？ 答10：兼容。但需注意很多商业化的蛋白酶cocktails含有EDTA。＞1mM EDTA会抑制酶活性。 |
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注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅能用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
