▶▶ 载体：A23187 / 4-bromo-A23187 /Ionomycin

▶▶ 探针：Fluo-3, AM/Fluo-4, AM/Rhod-2, AM/Rhod-4, AM（可见光激发）

▶▶ 探针：Fura-2, AM/Indo-1, AM（紫外光UV激发）

▶▶ 螯合剂：EGTA（金属螯合剂）

搜索关键词：Calcium Ionophore 钙离子Ca2+载体；Calcium Indicators 钙离子指示剂；Visible light-excitable 可见光激发；UV-excitable紫外光激发；Ionomycin离 子霉素；Fluo-3, AM CAS: 121714-22-5；Fura-2, AM CAS:108964-32-5;

背景描述：

钙（Calcium）是一种重要的且普遍存在的第二信使，参与调控各种各样的细胞过程，包括细胞增殖，基因转录，肌肉收缩和胞吞作用。响应于大量的刺激物，钙离子（Ca2+）从胞内的储存池释放出来；而胞内Ca2+浓度的增加会引起细胞功能的活化、调节和终止。许多泵和离子通道都允许这种独特的阳离子进入和离开细胞，并且在细胞质和胞内蓄池间移动。

我司（懋康生物，MKbio）提供各种优质的指示剂/探针来检测Ca2+释放；Ca2+螯合剂和离子探针用做对照，以检测钙离子信号通路调控的酶活性。

▶ A1. 钙离子载体（Ca²⁺ ionophores）基本介绍

1. A23187（CAS NO：52665-69-7），由于能够非常明显的提高二价阳离子穿透生物膜，呈现出离子载体（ionophore）特性。A23187对Ca2+具有高度的选择性，因此常用来增加完整细胞的胞内Ca2+水平，进而研究胞内Ca2+介导的生理事件。含内源性的UV激发的自荧光，不能与UV激发的Ca2+指示剂联合使用，比如：Fura-2。但仍可与长波长激发的钙离子指示剂，如Fluo-2联合使用。 

2. 4-Br- A23187（CAS NO：76455-82-8），高度选择性的Ca2+载体，能够提高胞内Ca2+水平。通常用做荧光探针确定胞内Ca2+水平的校准标准品（calibration standard），用来平衡胞内外的Ca2+水平，以及运载Mn2+进入细胞以淬灭胞内探针的荧光。作为抗生素A23187的卤化衍生物，基本没有内源荧光，可与UV激发的Ca2+指示剂如Fura-2，Indo-1，Quin-2，以及可见光激发的指示剂如Fluo-4，Fluo-3，Rhod-2联合使用。还能用来平衡胞内外Mg2+浓度，适合校准Mg2+指示剂。 

3. 离子霉素（Ionomycin，CAS：56092-81-0），一种有效的Ca2+载体，通常用来校准荧光Ca2+指示剂以及修饰胞内Ca2+浓度，以及用在对细胞过程中Ca2+的调控特性的研究中；

▶ A2. 钙离子载体订购信息：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 杨先生。

▶ B1. 可见光激发钙离子指示剂（Visible-lightexcitable Ca²⁺ indicators）的优势

与紫外光激发的荧光探针相比，如Fura-2和Indo-1，可见光激发Ca2+探针具有以下特点：

1）适用于大多数的激光共聚焦钙离子浓度检测系统，包括共聚焦激发扫描显微镜以及流式细胞仪等。

2）具有更强的染料吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化，从而降低了对活细胞的光毒性。

3）Ca2+依赖性荧光强度增强，对Ca2+变化水平检测敏感度更高。

4）降低样品自荧光以及光散射的干扰。

5）兼容光激活探针以及UV-激发试剂，因此更方便于多参数检测。

6）无光谱偏移。

▶ B2. 常见的几种可见光激发钙离子指示剂基本介绍

1. Fluo-3, AM（CAS NO：121714-22-5），常用的可见光激发波长Ca2+荧光探针，具有较高的Ca2+捕获能力，通过荧光强度的变化直接反映Ca2+信号的动力学变化。当Fluo-3以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但一旦与Ca2+结合即可产生很强的荧光，荧光信号增强60~80倍，此时的最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等来检测胞内钙离子水平的变化。 

2. Fluo-4, AM（CAS NO：273221-67-3），Fluo-3的改良版本，通过将Fluo-3结构上的氯离子（Cl-）替换为电子吸引力更强的氟离子（F-），使得最大激发波长往短波长偏移10nm左右。正由于这个波长更接近氩激光器的波长，则当使用氩激光器来激发探针Fluo-4，能够得到更强的荧光强度，比Fluo-3强一倍。另外，Fluo-4的Ca2+亲和力几乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上几乎同Fluo-3。Ca2+结合后的最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。 

3. Fluo-8, AM，目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，其荧光强度比Fluo-4强两倍，比Fluo-3强四倍。 

4. Rhod-2, AM（CAS NO：129787-64-0），一种高亲和力的可见光激发波长Ca2+荧光探针。类似于Fluo-3或Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着Ca2+浓度变化发生明显的迁移，荧光信号一旦与Ca2+结合后明显增强。不同于Fluo-3或Fluo-4，Rhod-2的波长更长（Ex/Em=549/578 nm，Ca2+结合），这一特性使其更适合具高水平自荧光信号细胞或组织的Ca2+水平检测，还可用来检测由光感受器和笼锁Ca2+螯合剂光激活导致的Ca2+释放。

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▶ C1. 紫外光激发钙离子指示剂（UV-excitable C a²⁺ indicators）基本介绍

1. Fura-2, AM（CAS NO：108964-32-5），一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Fura-2的最大激发波长发生蓝色迁移，由原来的363nm（Ca2+-free）迁移到335nm（Ca2+-saturated），而最大发射波长基本未变化，保持在510nm左右。通常情况，分别用最大激发波长340nm和380nm来激发Fura-2，且用340/380nm激发下的荧光比值来检测细胞内Ca2+浓度。使用比值检测，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。 

2. Indo-1, AM（CAS NO：112926-02-0），一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca2+荧光探针。一旦与Ca2+结合后，Indo-1的最大发射波长向短波长迁移，由原来的475nm（Ca2+-free）迁移到401nm（Ca2+-saturated），而最大激发波长无明显变化，维持在346nm~ 330nm范围内，适宜用氩离子激发器的UV激发光谱（351~364nm）进行荧光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是发射波长率图Ca2+荧光探针，特别适合流式细胞仪检测，因其可在控制单一激发波长的条件下轻易调整发射滤片，也特别适合多色荧光检测。使用发射波长下荧光强度的比率来测定细胞内Ca2+浓度，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。实际检测，推荐使用最大发射波长分别用405nm和485nm。

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▶ D1. 钙离子螯合剂（EGTA）基本介绍

EGTA，英文名Ethylene Glycol Tetraacetic Acid，中文名乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，CAS：67-42-5，各种缓冲液中的一种重要化学试剂。最广泛使用的一种钙离子螯合剂，可在镁离子Mg2+存在情况下，用来测定钙离子，因钙离子Ca2+-EGTA复合物的稳定性约比Mg2+-EGTA复合物强100,000倍。可用来制备钙离子缓冲液和调控钙离子浓度。

常在钙离子载体如Ionomycin（离子霉素）存在的条件下，使用CaEDTA buffer原位校准细胞内钙离子指示剂。

▶ D2. 钙离子螯合剂（EGTA）产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 杨先生。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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