关键词:
淋巴细胞活化(Lymphocyte Activation),胞内细胞因子表达,流式分析FACS,PKC激活剂 PMA,钙离子载体,蛋白转运阻断剂,CAS:22373-78-0
细胞因子(Cytokines)表达水平高低直接反映细胞在特异性刺激剂(物)下的应答活动,免疫学研究通常使用适当的刺激剂来激活细胞应答,并通过某些药物如莫能霉素(monensin)或布雷非德菌素A(Brefeldin A,BFA)作用以阻断胞内高尔基体介导的蛋白转运,促使细胞因子累积,提高细胞因子的胞内信号,从而能借助流式分选技术(FACS)检测细胞因子的表达水平。细胞因子表达具有自身的特征性。
常见的蛋白转运抑制剂:
1、Monensin 莫能霉素,CAS:22373-78-0
简单描述:天然离子载体(ionophore),选择性结合单价阳离子如Li+、Na+、K+、Rb+、Ag+和Tl+,并将这些阳离子转运到细胞膜内。可破坏高尔基体,抑制细胞内的蛋白转运,常用作蛋白转运抑制剂,用于抑制细胞因子等分泌型蛋白的分泌,使其保留在细胞内。
2、Brefeldin A(BFA,布雷非德菌素A),CAS:20350-15-6
简单描述:一种常用的蛋白转运抑制剂,特异性地可逆地阻断蛋白质从内质网(ER)转运到高尔基体(Golgi)。经BFA处理,高尔基体很快被破坏并融合到内质网上,该过程呈现能量、温度和微管依赖性。BFA是一种真菌代谢物,最初曾用作抗病毒试剂,现主要用于研究蛋白转运。BFA也常被用于抑制细胞因子等蛋白的分泌,并用于增强分泌蛋白的免疫染色检测。BFA可激活神经鞘磷脂循环(sphingomyelin cycle),还可诱导一些肿瘤细胞发生凋亡。
一些应用实例:
细胞 因子 |
克隆号 |
靶向细胞 |
刺激物 |
刺激时间 |
蛋白转运抑制剂 |
表面标志蛋白 |
IL-2 |
JES6-5H4 |
Splenocytes |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
IL-3 |
MP2-8F8 |
Purified CD4+ T cells stimulated with immobilized anti-CD3 (10 μg/ml)+ soluble anti-CD28 (2 μg/ml) + IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 + IL-4 for 3-4 days |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD4 |
GM-CSF |
MP1-22E9 |
Splenocytes stimulated with immobilized anti-CD3 (10 μg/ml) + soluble anti-CD28 (2 μg/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 3-4 day |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
IFN-γ |
XMG1.2 |
Splenocytes |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
货期 |
MZ2101-1ML |
Monensin Solution (1,000×) 莫能霉素溶液(1,000×) |
1ml |
165 |
现货 |
MZ2102-100MG |
Monensin, Sodium Salt 莫能霉素(钠盐) |
100mg |
460 |
现货 |
MZ2103-200UL |
200μl |
245 |
现货 |
|
MZ2103-1000UL |
Brefeldin A (BFA, 5mg/ml) 布雷非德菌素A |
1ml |
980 |
现货 |
MZ2104-5MG |
5mg |
880 |
现货 |
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MZ2104-25MG |
Brefeldin A (BFA, Powder) 布雷非德菌素A(粉末) |
25mg |
3080 |
3-4周 |
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