Luc 报告基因底物/ D-Luciferin D-萤火虫荧光素钾盐

活体成像研究/体外生物发光研究/转录水平研究

搜索关键词：

Luc reporter gene 报告基因；In vivo imaging 活体成像研究；转录水平研究；荧光素酶/ATP水平研究；报告基因质粒；报告基因病毒颗粒；萤火虫荧光素；甲虫荧光素；CAS：115144-35-9；

基本描述：

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，D-荧光素（底物）被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染进入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

基本应用：

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。

常见商业化类型的差异（荧光素钾，钠，游离酸）：

目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素（钠盐），和D-荧光素（钾盐）。这三种产品主要差别在于溶解特性。

1）D-荧光素（游离酸）在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。

2）D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品，在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

3）D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）基本上没有差别，主要是使用习惯等因素影响。整体来看，钾盐的应用文献明显多于钠盐。

D-荧光素钾盐基本特性：

1）CAS NO：115144-35-9

2）化学名：4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt

3）分子式：C11H7N2O3S2K

4）分子量：318.42 g/mol

5）纯度：＞99% (HPLC)，分子生物学级（超纯）

6）外观：浅黄色至黄色粉末

7）溶解性：溶于水（60 mg/ml）

使用方法：

A．体外生物发光检测

1）储存液制备

用蒸馏水溶解D-荧光素（钾盐），配制成15mg/ml的储存液（100×），混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150µg/ml（相当于468µM）。

2）荧光素酶反应缓冲液制备

配方【1×，参考Yuichi Oba, et al., 2003】：100mM Tris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl2，250µM CoA，150µM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液（2×）。

3）收集细胞裂解上清（荧光素酶表达）

根据需要检测的细胞类型，选择合适的裂解液进行细胞裂解，离心收集上清后续检测待用。

4）萤火虫荧光信号检测

【注①】：萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪（luminometer）类型（是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计）。根据特定发光测定仪，来考虑注射用量和程序设置。

【注②】：需设置不含荧光素酶的孔（用作阴性对照），以测定背景荧光。

例：注射式冷光测定仪（injectible luminometer，单样或微孔板，200µl终体积）

a）吸取100µl荧光素酶反应缓冲液（2×）到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔（最好使用全白平底的96孔板）；

b）吸取50~98µl裂解上清到皿或孔内；

c） 如果有需要，用水来补足使得总体积到198µl；

d）设置程序注射2µl荧光素储存液（使工作浓度150µg/ml），程序：2~5秒延迟（delay），之后10s测定。

B．活体成像分析

1）用无菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素（钾盐）工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2）注射量取决于注射方式，具体如下：

3）注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

相关产品：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。