| 目录号 | MX2205-10ML | 售价 | 880.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 10ml | 运输温度 | 室温运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 线性化聚乙烯亚胺 | 保存温度 | 4℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | 49553-93-7 | 有效期 | 1年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 转染试剂 | 订购数量 |
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产品简介: PEI 40K Transfection Reagent 线性化聚乙烯亚胺转染试剂
产品标签 PEI 40K转染试剂，PEI 25K转染试剂；线性化聚乙烯亚胺；PEI 40000；PEI25000；Lipofectamine 2000；Lipofectamine 3000；
产品信息
产品描述 线性化聚乙烯亚胺PEI 40000（Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K）是一款优秀和低成本的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中，PEI在宽广的生产规模内（从96孔板到100L生物反应器）能提供连续性的高基因表达。 作为线性化聚乙烯亚胺PEI25000（PEI 25K）的升级产品，操作更简单，且具有连续性的更高表达滴度，优势在于：1）PEI 25K转染溶液通常需几个小时来配置，然而，PEI 40K在2个小时内即可转化为即用型的溶液；2）PEI 25K含4-11%残留的丙酰基基团，该基团阻止聚合物骨架紧密结合到DNA。然而，PEI 40K完全去丙酰化结构，意味着每个批次保持连续性更高转化效率。 本品是PEI 40K的无菌溶液，浓度为1mg/ml，直接使用即可。1ml本品足以用来转染250μg DNA，或者，6孔板内约做60-120次转染。
保存与运输方法 保存：+4℃保存，1年有效。 运输：室温运输。
注意事项 1）请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。 2）使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。 3）对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。 4）对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。 5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
试剂准备 稀释液准备：用细胞培养级水来制备150mM NaCl（比如：称取876.6mg高纯NaCl加入80ml细胞培养级水，充分溶解后，定容到100ml，经0.1或0.2μm滤膜过滤除菌。） 【注意】：也可使用商业化的无血清培养基（比如Opti-MEM I）来制备转染复合物。
一、操作方法（贴壁细胞） 1.1铺板 a）转染前18-24h进行铺板，调整合适的细胞密度（参考表1），使其在转染时细胞密度达60-80%。 【注意】：高血清水平会抑制转染效率，大多数情况，低血清水平（≤5%）能产生最高的转染效率。
1.2转染步骤（以6孔板的单孔为例） a）转染前1-2h，每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。 b）制备PEI 40K-DNA转染复合物（严格按照顺序进行）：①往300μl稀释液内加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀；②往混合物内加入8μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低速涡旋5s；③无菌环境，室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。 c）将PEI 40K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，使得复合物分散均匀。 【注意】：以上步骤可通过调整PEI 40K-DNA复合物在稀释液内的体积（稀释液为培养总体积的10%）来进行放大或缩小（可参考表2）。确保DNA/PEI 40K=1：4！
1.3 孵育 a）37℃，5% CO2培养箱内培养细胞，转染后12-18h，去除含PEI 40K-DNA复合物的培养液，更换新鲜的生长培养基。 b）通常，转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。
二、操作方法（悬浮细胞） 2.1接种准备 于转染前2-3h，按照1.0×106/ml培养接种细胞。 2.2 转染步骤（以：50ml培养物/250ml摇瓶为例） a）制备PEI 40K-DNA转染复合物（严格按照顺序进行）：①往2.5ml稀释液内加入50μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀；②往混合物内加入200μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低速涡旋5s；③无菌环境，室温静置20min以形成PEI 40K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。 b）将全部转染溶液加入25ml悬浮细胞内。 c）将悬浮细胞放回培养箱内。 2.3 孵育 a）在培养箱内摇动培养2-3h，之后加入25ml新鲜生长培养基。重新放回培养箱。 b）通常，转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。
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