目录号 | MX2211-0.15ML | 售价 | 350.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 0.15ml | 运输温度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | 4ºC保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 脂质体转染试剂 | 订购数量 |
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产品简介: Lipo2000 Transfection Reagent 脂质体转染试剂
产品信息
产品描述 Lipo2000脂质体转染试剂(Lipo2000 Transfection Reagent)是一款多用途转染试剂,适用于核酸(DNA、RNA)的转染,能在绝大多数贴壁和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)提供高效转染。独特的配方使其能直接加入培养基,血清的存在不会影响转染效率。转染后无需去除DNA- Lipo2000复合物或更换培养基,也可根据自身需求在转染4-6h后更换新鲜培养基。
本品以无菌液体形式提供,浓度为1mg/ml。其使用方法和Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent基本一致,并且经过对HEK293、HeLa等细胞的转染测试,转染效率和Lipofectamine™ 2000相当。 通常情况下,对于24孔板的DNA转染,每次用2μl左右,则1.5mlLipo2000约可转染750个孔;对于24孔板的siRNA转染,每次用1μl左右,则1.5mlLipo2000约可转染1500个孔; 保存与运输方法保存:+4℃保存,1年有效。切勿冻存。 运输:冰袋运输。
注意事项 1)使用高纯的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率,内毒素是影响转染效率高低的重要因素。 2)使用Lipo2000脂质体转染试剂需确保高细胞密度,建议转染时细胞密度达90-95%,有助于获得最高转染效率和表达水平,且能最小化高转染活性导致的细胞生长降低影响。可通过优化实验条件来降低细胞密度,但需注意不同实验间维持一个标准的接种步骤,因转染效率依赖于细胞培养密度。
3)转染过程中不要添加抗生素到培养基,否则会导致细胞死亡。 4)为了获得最佳的转染效率,制备转染复合物时要求用无血清培养基(比如Opti-MEM I)稀释DNA和转染试剂,因血清会影响复合物的形成。其他无血清培养基(比如DMEM)也能用来稀释DNA和转染试剂,但转染效率有可能会降低。另外,需要特别注意某些无血清配方会抑制Lipo2000介导的转染,比如CD293, SFMII, VP-SFM等。
5)初次使用制备复合物时,最好优化DNA(µg)和Lipo2000脂质体转染试剂(µl)的比例。DNA和Lipo2000的比例,绝大多数细胞系通常推荐1:2-1:3,比如:24孔板内接种0.5-2×105个细胞,使用0.8-1µg DNA和2-3µL Lipo2000。通过调整DNA/ Lipo2000优化转染效率很有必要。
6)Lipo2000脂质体转染试剂应该在4℃保存,不可冻存。使用后立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,否则有可能导致脂质体氧化而影响转染效率。 7)Lipo2000脂质体转染试剂不能涡旋或离心,宜缓慢晃动混匀。 8)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 转染步骤(以质粒DNA的24孔板为例) 【注意】:对大多数细胞来说,DNA(µg)和Lipo2000(µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。
1. 细胞准备 1)贴壁细胞:转染前一天,用500 µl不含抗生素的培养基接种细胞,使之在转染时细胞达90-95%汇合(0.5~2×105 细胞/个孔,24孔板)。 2)悬浮细胞:转染当天,于准备DNA-Lipo2000复合物之前,用500µl不含抗生素的培养基接种4~8×105细胞即可。
2.按照以下体系配制DNA- Lipo2000脂质体转染试剂复合物: 1)对于每孔细胞,在EP管内分别加入50µl无血清培养基(比如Opti-MEM™ I Reduced Serum Medium)和0.8 µg DNA轻柔混匀,制成DNA稀释液。 2)对于每孔细胞,在EP管内分别加入50µl无血清培养基(比如Opti-MEM™ I Reduced Serum Medium)和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀),轻柔混匀,制成Lipo2000稀释液,室温静置5min。【注意】:需要在30min内混合稀释的DNA和Lipo2000,更长的等待时间会降低活性。如果使用DMEM作为稀释培养基,那必须在5min内混合稀释的DNA和Lipo2000。 3)将DNA稀释液和Lipo2000稀释液混合(总体积100µl),轻柔混匀,室温静置20min, 形成DNA-Lipo2000复合物,这一混合物可能呈浑浊状态,但不会抑制转染效率。【注意】:DNA-Lipo2000复合物在室温下至少可稳定保存5h。
3.将上方制备好的DNA-Lipo2000复合物加入接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。【注意】:如果要在无血清条件下转染,使用含血清的正常培养基进行细胞接种。再加入复合物前吸掉培养基,更换为500µl无血清培养基。 4. 37℃,5% CO2培养箱培养24-48h,直至能进行转基因表达分析,无需去掉复合物或更换培养基。然而,有必要在4-6 h后更换生长培养基,不会降低转染活性。
5.特殊说明 1)对于稳转细胞株:则在转染24h后,按照1:10或更高比例接种细胞到新鲜生长培养基。转染48h后加入筛选培养基。 2)对于悬浮细胞株:在细胞中加入DNA-Lipo2000复合物后,如需要可以4h后加入PMA和/或PHA。比如:对于Jurkat细胞,分别加入PHA-L(终浓度1µg/ml)和PMA(终浓度50ng/ml),可以提高CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞,只加入PMA(终浓度50ng/ml)足以提高启动子活性。
转染体系的放大或缩小 对于不同的细胞培养板,Lipo2000、DNA、细胞和培养基的使用量根据培养表面的不同按比例进行调整,具体参考表I。对于自动化、高通量体系,以96孔板形式制备更大的复合物体积。需要注意的是,需要进行快速的96孔板转染(细胞铺板和转染同时进行),直接在平板中制备复合物,然后将细胞悬液加入到复合物内,这样进一步减少了转染时间。此种改进步骤经过293-H,293-F,COS-7L和CHO细胞的试验,同传统方法相比活性稍低。
表I.不同细胞培养容器中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量
【*】:不同厂商提供的细胞培养容器表面积可能有所不同。 【**】:稀释DNA/RNA或Lipo2000所用的无血清培养基用量。 【注意】:该表用量仅供参考,具体用量请根据细胞类型、铺板密度等其他实验条件进行优化。
附表II Lipo2000脂质体转染试剂用于不同细胞转染用量参考(以96孔板为例)
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
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