Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）

产品信息

【温馨提示】：见我司懋康生物整理的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）产品专题。

【温馨提示】：见我司懋康生物整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒（定量检测）产品专题。

【温馨提示】：见我司懋康生物整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒（定性，干细胞检测）产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一类磷酸酯酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Mehod)）利用的是偶氮偶联法来定性检测磷酸酶活性。工作原理是在pH 9.2-9.8的碱性条件下，细胞内ALP可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片等的ALP染色，ALP阳性反应部位呈蓝色，位于胞浆，染色结果比金属盐沉淀法相对可靠些。

产品组成

保存与运输方法

保存：按照对应组分的要求来保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   血液、骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2）   培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3）   培养细胞或爬片细胞不建议采用ALP固定液，此ALP固定液适用于血液或骨髓细胞涂片的固定。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 ALP染色液的准备

临用前，取适量的AS-BI染色液（B1）和FBB染色液（B2）按照1：1比例混合，即得到ALP染色液，现配现用。

二、 涂片或切片染色

1.1    血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片放入ALP固定液固定3min（注：梯度入水的石蜡切片无需固定），水洗。

1.2    滴加新鲜配制的ALP染色液，放入湿盒，避光孵育15-20min，水洗。

1.3    入核固红染色液复染3-5min。

1.4    水洗、镜检或甘油明胶封片后镜检。

三、 贴壁细胞染色

2.1 取6孔板或其他容器培养的细胞，弃培养液，PBS清洗细胞。

2.2 加入4%多聚甲醛固定10-20min，PBS清洗细胞。

2.3 滴加新鲜配制的ALP染色液，放入湿盒，避光孵育15-20min，PBS清洗。

2.4 入核固红染色液复染30s~3min。

2.5    PBS清洗、镜检。

三、染色结果

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文献引用：

1）Fu, L., Jin, P., Hu, Y., Lu, H., & Su, L. (2020). KR‑12‑a6 promotes the osteogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells via BMP/SMAD signaling. Molecular Medicine Reports, 21, 61-68.

For ALP staining, hBMSCs in each group were washedtwice with PBS at the end of the 7‑day KR‑12‑a6‑treatmentperiod, fixed with 4% paraformaldehyde for 30 s, and then stained using the ALP staining kit (Maokang Biotechnology, Shanghai)according to the manufacturer's instructions. images were acquired by an inverted phase contrast microscope (CKX41, Olympus) under x100 magnification. At leastfive fields per sample were randomly selected and observed.

1）Fu, L., Jin, P., Hu, Y., Lu, H., & Su, L. (2020). KR‑12‑a6 promotes the osteogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells via BMP/SMAD signaling. Molecular Medicine Reports, 21, 61-68.

For ALP staining, hBMSCs in each group were washedtwice with PBS at the end of the 7‑day KR‑12‑a6‑treatmentperiod, fixed with 4% paraformaldehyde for 30 s, and then stained using the ALP staining kit (Maokang Biotechnology, Shanghai)according to the manufacturer's instructions. images were acquired by an inverted phase contrast microscope (CKX41, Olympus) under x100 magnification. At leastfive fields per sample were randomly selected and observed.

2)Peiying Lv, Pengfei Gao, Yanyan Yang, Zihui Wang, Lu Sun, Feifei Mo, Guangjie Tian, Mingjie Kuang, Yonglan Wang.Osteocyte-derived exosomes induced by mechanical strain promote human periodontal ligament stem cell proliferation and osteogenic differentiation in an inflammatory environment via the miR-181b-5p/PTEN/AKT signaling pathway.Stem Cell Research & Therapy；

The activity of alkaline phosphatase (ALP) was analyzed using an Alkaline Phosphatase Staining Kit (MKbio, Shanghai, China). Staining images were acquired using an inverted microscope, and ImageJ was used to analyze the images.

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。