DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 细胞直接PCR裂解液

【单瓶试剂，细胞裂解+PCR一步到位】

产品关键词：

Viagen Biotech; DirectPCR^® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K 蛋白酶K；302-C (301-C)；

产品介绍：

Viagen DirectPCR^® DNA Extraction System（DirectPCR^® DNA提取系统）是一种单管系统，用于从小鼠尾巴，耳片，卵黄囊和培养细胞内快递制备DNA。Viagen Biotech, Inc科学家开发的专利组分（正在申请专利）允许用DirectPCR® DNA Extraction System获得的DNA提取物与基因分型用的基因组PCR兼容。生物样本的粗提物与许多分子生物学级的试剂比如PCR都难以兼容，部分原因在于粗提物内含有抑制剂。DirectPCR®不仅介导生物样品的快速裂解，而且含有抑制剂，能够有效抑制PCR扩增用粗提裂解物中存在的抑制效应，同时最大程度保持释放出来的基因组DNA的完整性。专利申请中的DirectPCR®操作起来，完全消除任何溶液转移或开管步骤，根本上节省了大量时间和精力。

产品特点：

1）省时：更少的动手时间；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；

2）省钱：仅需成本的反应流程；

3）安全：无有机试剂；

4）环保：更少消耗（有机试剂，管子，枪头等等）

5）可靠有效：100%成功率保证高产量

简单流程：

1）用DirectPCR®裂解细胞；

2）85℃孵育45min；

3）取1μl裂解液进行PCR基因型研究。

详细流程：

1）10cm细胞培养板细胞，使用添加新鲜制备的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 细胞裂解液重悬细胞。蛋白酶K在DirectPCR®中稳定保存~24h。如果处理少量细胞，会很难称量蛋白酶K粉末，可直接使用Viagen提供的基因组PCR级的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用浓度为0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）。【注意】：若使用小量细胞，可用去离子水稀释DirectPCR®高达10倍，然后使用合适更多体积的裂解液用于PCR。见表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell)起始使用条件。

2）置于旋转杂交炉中，55℃转动管子处理5-6h或直到看不见组织团。若有必要，能过夜裂解样本，不会影响效率。完全裂解至关重要。要想获得更具有重复性的结果，中途摇动一下瓶子以更换管子的位置一次，最好在处理2-3h之后。

3）水浴锅内85℃孵育粗提液45min。【可选】于步骤4）前离心10s沉淀毛发。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不会降低效率。

4）每50μl PCR反应体系加入0.5-1.0μl裂解液。推荐PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。

表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 起始使用条件。

* Lysis using rotation hybridization oven. 

** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted.  Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs.  Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.

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下载：DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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