Acti-stain 555 phalloidin橙红色荧光标记鬼笔环肽

(Cytoskeleton Inc. PHDH1-A）

产品标签

Phalloidin 鬼笔环肽；Actin-Stain^TM 555 Phalloidin；F-actin 肌动蛋白（聚合）；Actin filaments 肌动蛋白丝；Cytochalasin细胞松弛素；Alexa Fluor 555 phalloidin（# A34055，Thermo life）；

基本描述

鬼笔环肽（Phalloidin），又称鬼笔鹅膏素，是从毒蘑菇鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离到的一种七氨基酸多肽毒素，以极高亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin（聚合形式的肌动蛋白）（Kd=20nM）。鬼笔环肽将肌动蛋白聚合的临界浓度降至≤1μg/ml，从而用作一种聚合增强剂。荧光探针标记的鬼笔环肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能对组织培养细胞、组织切片和无细胞制备物进行肌动纤维丝染色。经鬼笔环肽标记的肌动纤维丝仍能维持标记前的许多功能特征包括能够与肌球蛋白相互作用。

产品应用

 1. [Fluorescent staining of actin filaments in fixed tissue sections and tissue culture cells preparations]; 对固定的组织切片和组织细胞培养物进行肌动蛋白丝的荧光染色；

2. [Preparation of stabilized fluorescent actin filaments in vitro.] 体外制备稳定的荧光肌动蛋白丝；

肌动蛋白染色（Actin Staining）特别适用于确定活细胞和固定细胞内细胞骨架的结构和功能。活细胞内的肌动蛋白细胞骨架很有活力和结构不稳定，因此，对肌动蛋白结构的标记或染色前需用甲醛固定。

产品特征

1. 外观：红色固体；

2. 纯度：>99%

3. 分子量：1775

4. 保存：冻干粉4℃干燥保存半年有效；储存液-20℃避光保存半年有效；

5. 重溶方法：使用前简单离心使得产品都降至管底，加入500µl 100%甲醇充分溶解后配置成14µM储存液。建议按照10×50µl分装，-20℃避光保存，稳定保存6个月。

6. 光谱图：

应用实例

Fig 1.  Actin-stain^TM 555-鬼笔环肽（Cytoskeleton, PHDH1）染色下的Swiss 3T3成纤维细胞。Actin Stress Fibers stained with Acti-stain™ 555 in a Swiss 3T3 cell. Swiss 3T3 cell with activated Rho, nucleus is stained with Dapi (blue) and F-actin is stained with Acti-stain™ 555 (red F-actin, Cat.# PHDH1).

使用方法【仅作参考】：

1. 免疫荧光（Immunofluorescence）

需要材料：1）Actin-stain^TM 555 Phalloidin（PHDH1）；2）盖玻片爬片生长达到半汇合的Swiss 3T3细胞；3）PBS buffer；4）固定剂；5）破膜剂；7）抗荧光淬灭封片剂；8）100nM DAPI in PBS；11）载玻片；12）盖玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨询我司工作人员或详见说明书。

2. 制备稳定的荧光标记肌动蛋白丝（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

体外肌动蛋白运动试验（in vitro motility assays），稳定的荧光标记肌动蛋白丝是研究肌球马达蛋白非常优秀的底物材料。Actin-stain^TM 555 Phalloidin结合对肌球蛋白ATPase的肌动蛋白激活无影响。

需要材料：

1）肌动蛋白Actin protein（#AKL99-A）；

2）通用肌动蛋白缓冲液General Actin buffer（#BSA01）；

3）10×聚合缓冲液Polymerization buffer（#BSA02）；

4）Actin-stain^TM 555 Phalloidin（PHDH1）；

操作流程：

1)  用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌动蛋白缓冲液来重悬兔肌肉肌动蛋白（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其浓度为1mg/ml。

2)  加入1/10体积的聚合缓冲液来聚合肌动蛋白，室温孵育1h。

3) 用含70nM Actin-stain^TM 555 phalloidin的聚合缓冲液按照1:100的比例稀释聚合的肌动蛋白丝。

4) 吸取1ul标记好的肌动蛋白滴在已滴有一滴抗荧光淬灭剂的载玻片上。

5) 取一干净盖玻片盖在液滴处，用纸巾吸掉多余液体。

6) 荧光显微镜观察荧光纤维。肌动蛋白丝平均长度为2-10um，在4℃避光能稳定保存1周。

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【说明A】：本品约可做300-350张细胞爬片；

【说明B】：若想保持优异的染色结果，又受成本所限制，强力推荐使用我司MKbio的同类型产品iFluor 555 Phalloidin（# MX4411-300T），绝对进口品牌，经实验室和客户的双重验证，染色优异，价格实惠，欢迎咨询和订购。电话：021-54736159，QQ：2971634497。

【提示A】：见我司整理的MKbio鬼笔环肽及衍生物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）产品专题。

【提示B】：见我司整理的Cytoskeleton 鬼笔环肽（Phalloidin）产品专题。

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引用文献（#PHDH1-A）：

Burks et al., 2013. ISGylation governs the oncogenic function of Ki-Ras in breast cancer. Oncogene. doi:10.1038/onc.2012.633

Andersen et al., 2012. Escherichia coli uropathogenesis in vitro: Invasion, cellular escape, and secondary infection analyzed in a human bladder cell infection model. Infect. Immun. 80, 1858-1867.

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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