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Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae 酵母转化试剂盒(用于酿酒酵母)
目录号 MF2501-200T 售价 900.00元
规格 200T 运输温度 冰袋运输
其他名称 Yeast Transformation Kit 酿酒酵母转化试剂盒 保存温度 见说明书
CAS号 N/A 有效期 1年
应用 酵母感受态细胞制备和转化试剂盒 订购数量
产品简介:

Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae  

酵母转化试剂盒(用于酿酒酵母)



【通知】本试剂盒自2024/4月开始升级到第二代,在第一代试剂盒的基础上添加感受态冻存液,一改第一代试剂盒中感受态现做现用的严格要求,用户能更灵活的调整感受态制备和转化的时间,更人性化。同时,维持包装规格的基础上,维持原价格。


产品信息

产品名称

产品编号

规格         

价格(元)

Yeast Transformation Kit IIfor Saccharomyces cerevisiae 

MF2501-200T

200T

900

【温馨提示】见我司懋康生物整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay)产品专题。


产品描述

本酵母转化试剂盒(Yeast Transformation Kit)是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒,操作简单快捷,适用菌株广泛,能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。

本品基于第一代试剂盒做出升级,新增感受态冻存液,这样制备好的感受态不用现做现用,能置于-80℃稳定保存6-12个月。


产品组分

组分编号

组分名称

规格    

储存方法

MF2501-A

1M LiAc Solution 1M醋酸锂溶液

10 ml

室温保存

MF2501-B

50% PEG Solution 50%PEG溶液

50 ml

室温保存

MF2501-C

Carrier DNA (10mg/ml)载体DNA(10mg/ml)

2×1ml

-20ºC保存

MF2501-D

Competent Cell Storage Solution冻存液

10ml

室温保存


保存与运输方法

保存:Carrier DNA置于-20ºC保存,其他室温保存,1年有效。 

运输:冰袋运输。


注意事项

1) 第一次使用Carrier DNA,需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min,然后立即放在冰上,之后放在-20ºC保存。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。

2) PEG溶液低温情况下会析出,使用前最好常温温育确保完全溶解才使用。

3) 酵母转化整个过程请无菌操作。

4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

一、 酵母感受态细胞的制备

1.1 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线,30℃培养2-4天以活化菌种。

1.2 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线,30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时,接种。

1.3 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基,30℃培养过。

1.4 第二天转接到含50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,直至OD600达到0.5-0.8范围。4000rpm离心5min收集细胞,去上清。

1.5 用30ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。4000rpm离心5min,去上清。

1.6 沉淀用1.5ml的100 mM LiAc重悬(100 mM LiAc:150μl 1M LiAc+1350μl 无菌水混匀即可】,之后转移到1.5ml离心管内。4000rpm离心5min,去上清。

1.7 用1.0ml冻存液重悬沉淀,此时,即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl(或100μl)分装到1.5-2ml无菌冻存管内,或直接转化,或进行冻存。【注意】:如果进行文库转化,按600μl/管分装。

1.8 按照缓慢冷冻的方法(二选一):①将感受态放入程序降温盒内,再放到-80℃冰箱过夜,之后取出置于-80℃保存;②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内,再放于-80℃冰箱过夜,之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。【注意】:缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。


二、酵母质粒转化

2.1按照以下体系制备转化用混合液,每个转化反应需310μl的混合液。

组分

质粒转化混合液

1M LiAc Solution

36 μl

50% PEG Solution

240 μl

Carrier DNA (10mg/ml)

10 μl

质粒(~ 200 ng/μl)

5 μl(根据质粒的浓度加入相应的体积)

总体积

用无菌去离子水定容到310μl

2.2 取310μl转化混合液加入上述制备好的1管感受态细胞(50-100μl/管),用枪轻轻反复吹吸菌体,使得管底的酵母细胞充分悬浮。

2.3 置于30℃水浴锅孵育30min,每10min轻轻混匀一次。

2.4 置于42℃水浴锅热激30min,每10min轻轻混匀一次。

2.5 12000rpm离心15s,去掉上清液。

2.6 【可选步骤】用1ml YPD plus(MS6309-50ML)重新悬浮沉淀,30℃摇床震荡培养30-60min。12000rpm离心15s,去掉上清液。【注意】:转化产物使用YPD Plus复苏,转化效率可提高50-100%。若想提高现有酵母的转化效率,推荐进行此步操作。

2.7 往沉淀内加入100μl无菌去离子水,重新悬浮沉淀。并转移到相应的酵母培养平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,30℃培养2-4天。


三、酵母文库转化


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名称

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50ml

 


 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

 

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