Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell

碱性磷酸酶染色试剂盒（干细胞专用）

产品标签：

Phosphatase, Alkaline 碱性磷酸酶；ALP/AKP；对硝基苯酚磷酸盐（pNPP）；偶氮偶联法；显色法（定量）；染色法（定性）；

产品信息

【温馨提示I】：见碱性磷酸酶产品专题，了解更多相关产品资料；

【温馨提示II】：见碱性磷酸酶染色试剂盒产品专题；

【温馨提示III】：见碱性磷酸酶活性检测试剂盒产品专题；

【温馨提示IV】：见碱性磷酸酶常用生化底物及试剂盒产品；

产品描述

处于未分化状态的胚胎干细胞（ES）和诱导多潜能干细胞（iPS）典型特征是呈高水平的碱性磷酸酶表达，同时结合其他的一些表面标志物，来显示未分化细胞具自我更新的潜能。碱性磷酸酶（ALP，或AP）是一种水解酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化作用。固定ES或iPS用碱性磷酸酶染色试剂盒染色后，未分化细胞呈红/紫色，而分化细胞呈无色。

本碱性磷酸酶染色试剂盒特异性强，灵敏度高，可为ES/iPS细胞分化的表型评估提供可靠的依据。对于其他细胞来说，染色越深，表明细胞内ALP活性越高。以24孔板染色为例，分别可做50次和100次染色。

产品组分

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，6个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤（以24孔板染色为例）

1. 实验前准备材料：PBST缓冲液、PBS缓冲液

2. 染色工作液准备：按照如下比例【溶液A: 溶液B: 溶液C=1:1:1】，配制适量染色工作液。请务必根据单次实验用量制备染色工作液。为了保证最佳染色结果，需在配制30min内用完染色工作液，多余染色工作液请丢弃。

3. 染色步骤

1. 吸出细胞培养液，PBST洗2~3次，用0.5ml固定液室温固定2~5min。【注意】：固定不要超过5min，过度固定会导致ALP失活）。

2. 吸出固定液，PBST洗2次；

3. 吸出PBST。加入0.6ml/孔染色工作液覆盖细胞，室温避光放置5~15min；【注意】：染色过程需密切监督颜色变化，当颜色很明亮即可终止反应，否则会引起非特异性染色。

4. 吸出染色工作液，用PBS洗2次，最后保存于PBS或封片剂内防止干燥，显微镜下观察染色结果。结果判定：未分化细胞染色呈红/紫色，分化细胞染色呈无色。

5. 将平板保存在4℃。

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引用文献：

[1]Li, Z., Zhao, H., Chu, S. et al. miR-124-3p promotes BMSC osteogenesis via suppressing the GSK-3β/β-catenin signaling pathway in diabetic osteoporosis rats. In Vitro Cell.Dev.Biol.-Animal 56, 723–734 (2020). https://doi.org/10.1007/s11626-020-00502-0

An Alkaline Phosphatase Staining Kit (MP7503-50T, MKBio, Shanghai, China) was used for ALP staining. The cells were seeded into a 6-well plate, fixed with 4% paraformaldehyde (pH 7.4) for 1–2 min, and washed twice with phosphate buffered saline (PBS) and tris buffered saline with tween (TBST).

41.   Zhang X, Hong K, Sun Q, Zhu Y, Du J. Bioreducible, arginine-rich polydisulfide-based siRNA nanocomplexes with excellent tumor penetration for efficient gene silencing. Biomater Sci. 2021 Jun 28. doi: 10.1039/d1bm00643f. Epub ahead of print. PMID: 34180478.

PEI 25K was purchased from Maokang Biological Technology Co., Ltd