X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

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X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，IPTG，β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal），蓝白斑筛选，CAS：7240-90-6

产品信息：

产品描述：

X-Gal，英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside，中文全名5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，CAS NO：7240-90-6，是β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）的组织化学显色底物，能被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-羟基吲哚。5-溴-4-氯-3-羟基吲哚是一种可溶、无色的吲哚水解产物，随后通过二聚合和氧化反应，被转化为一不可溶蓝色产物-5,5’-二溴-4,4’-二氯靛蓝。

X-Gal是分子生物克隆实验中用来检测β-gal活性的一种主流试剂，可用来检测外源DNA是否插入质粒DNA的lacZ区。当外源DNA成功插入lacZ区，会破坏β-gal的α-互补，导致其活性丧失，则无法水解X-Gal使得菌落呈白色。而保留β-gal正常活性的细菌能产生蓝色菌落。许多其它应用也常将X-Gal用作底物来检测β-gal活性，这些应用包括：1）β-gal-抗体连接的免疫分析和免疫组化；2）基于β-gal诱导的大肠杆菌噬菌体检测；3）肿瘤进展微转移形成的检测。

X-Gal常常与IPTG（货号：MF2002-5G）联合使用进行蓝白斑克隆筛选。本品达分子生物学级别。

基本特性：

1）CAS NO：7240-90-6

2）英文同义名：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside; X-b-D-Galactoside; BCIG;X-Gal;

3）分子式：C14H15BrClNO6 

4）分子量：408.63 g/mol

5）纯度：≥99%

6）外观：白色至类白色或无色粉末

7）溶解性：溶于DMF（20mg/ml），DMSO

8）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. X-Gal储存液配制

称取0.2g X-Gal装入15ml离心管，加入10ml DMF，震荡使其充分溶解。按照1ml/管分装，并用铝箔纸包裹离心管使其避光，置于-20℃冻存，正常情况下6-12个月稳定。

2. IPTG储存液配制

称取0.238g IPTG（货号：MF2002-5G）溶于10ml去离子水中，充分溶解混匀后，经0.22μm滤膜过滤除菌，即得到100mM（100×）的储存液。按照1ml/管分装，置于-20℃冻存，高达一年稳定。

3. 蓝白斑筛选方法

X-Gal常与IPTG联合使用进行蓝白斑克隆筛选。

方法1：X-Gal、IPTG加入固体培养基（推荐）

1）高压灭菌已加琼脂的培养基，并冷却到50℃左右；

2）每ml培养基内加入10μl 20mg/ml X-gal溶液、10μl 100mM IPTG（使其终浓度达到1mM）；

3）加入适量筛选抗生素如氨苄青霉素，卡那霉素，羧苄青霉素等；

4）混匀后倒板，置于无菌超净台内使培养基凝固（通常需要30min）。

【注意】：蓝白斑筛选用的平板请置于4℃避光保存，1周稳定。

5）将转化的感受态细胞涂布到上述平台，于37℃倒置培养过夜，观察蓝白斑情况。

方法2：X-Gal、IPTG直接涂布平板表面

1）于无菌超净台内干燥倒好的平板；

2）加120μl 20mg/ml X-gal溶液、40μl 100mM IPTG到平板表面，并涂布均匀覆盖整个平板；

3）于无菌超净台内干燥上述平板，至少需要30min；

4）将转化的感受态细胞涂布到上述平台，于37℃倒置培养过夜，观察蓝白斑情况。

注意事项

1）X-gal的首选溶剂为DMF。若使用DMSO作为溶剂，选择相对新鲜且高质量的DMSO极为重要，持续性的研究发现由于使用旧或低质量DMSO造成很多问题。建议大部分实验都用DMF作为溶剂。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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