| 目录号 | MF2292-1000UL | 售价 | 299.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 1000UL | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 订购数量 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
产品简介: Stbl4 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签： Stbl4；Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；
产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。
产品组分：
菌株描述 Stbl4菌株来源于Stbl2菌株，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建，特别适用于克隆不稳定插入片段（比如：正向重复序列，逆转录病毒序列）。为了改善性能，引入gal-突变和F'附加体，lon-复原为野生型lon+等位基因。Stbl4不仅保持Stbl2的遗传特性（维护不稳定插入片段），而且据报道还能用于复杂二级代谢物的发现、CRISPR文库构建和维护。Stbl4中的mcrA 突变和mcrBC-hsdRMS-mrr序列的删除允许甲基化基因组序列的克隆。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯质粒DNA的获得。lacZ∆M15标记使其可用于蓝/白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。
Stbl4菌株基因型：mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal–thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)]
产品描述 本品是Stbl4菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件： 保存：-80℃保存，六个月有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 对不稳定DNA克隆或逆转录病毒/慢病毒载体克隆，涂板后应在30℃培养，以减少错误重组的发生概率。 2） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。 3） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。 4） 最好在冰上融化感受态细胞。 5） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。 6） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。 7） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。 8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1） 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。 2） 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。 3） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。 4） 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养70min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 【注意】：当质粒中含不稳定片段，30℃培养能降低错误重组的概率。当转化pUC19对照，需用37℃，225rpm培养60min来复苏。】 5） 5000rpm离心1min，吸走600 μl上清，留取100μl左右吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养17-20h，或30℃过夜培养20-24h。 【注意】：当质粒中含不稳定片段，30℃培养能降低错误重组的概率。当转化pUC19对照，需37℃过夜培养。 【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
附表1固体和液体LB培养基配方
附表2液体TB培养基配方
附录I几款Stbl感受态细胞的参数比较表（适用于不稳定DNA的克隆）
附录II几款Stbl感受态细胞的基因型（适用于不稳定DNA的克隆）
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
