Enhanced Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

产品标签

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM） K+indicator；PBFI AM 钾离子指示剂/探，SBFI AM 钠离子指示剂/探针，Asante Potassium Green-2，Valinomycin 缬氨霉素

产品信息

产品描述

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物，

是一种具细胞膜渗透性的新型K+荧光探针，具有容易加载、缓慢泄露、良好光稳定性和宽动力学范围等理想特征，正好弥补传统K+荧光探针PBFI AM（#MX4510）的缺陷。EPG-2 AM被可见光激发，最佳激发波长为517nm，但也能被传统波长488nm激发检测。虽然不是比率型探针，但其宽广的动力学范围使其甚至能检测到变化很小的K+浓度。EPG-2 AM用近红外波长的双光子激发下信号很强且抗荧光淬灭很好。也适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪和高通量筛选分析。

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

产品特性

1）   分子式：C55H64Cl2N2O19

2）   分子量：1128.02 g/mol

3）   纯度：＞ 80%（HPLC）

4）   最大激发波长：526 ± 3 nm（in methanol）

5）   最大发射波长：546 ± 3 nm（in methanol）

6）   解离常数（Kd）：18mM

7）   动力学范围（Fmax/Fmin）：12

8）   溶解性：溶于DMSO

9）   化学结构式：

常用操作流程（AM荧光探针）

以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。

1.1    使用无水DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM储存液，比如往50μg EPG-2 AM冻干粉内加入22μl DMSO，充分溶解后配制成2mM储存液。-20ºC分装干燥冻存，避免反复冻融。

1.2    通常在含适当浓度AM探针的无血清培养基中实现探针加载。建议正式实验前向加载培养基内加入Pluronic F-127以促进AM探针的分散。可用DMSO配置20% Pluronic F-127储存液或其他浓度，只需在正式实验前将其与EPG-2 AM储存液混合，然后加入加载培养基，保证其终浓度＜0.1%（w/v）。

1.3    室温或37℃孵育细胞（可能在室温的探针加载质量会高些），孵育浓度通常为1-10µM，孵育时间通常为30-60min，具体的请根据实际情况或参考文献资料。

1.4    【可选】对于大分子量AM探针（分子量≥1000g/mol），孵育结束，加入不含AM探针的细胞加载培养基额外孵育20-60min，以确保细胞将AM基团完全去酯化。

1.5    用不含血清和探针的培养基清洗细胞至少一次，以降低细胞外背景荧光。

1.6    最后用合适的仪器来检测荧光信号。检测用最大激发波长517nm，最大发射波长540nm。

【注意】：

a)      如果细胞加载培养基是以碳酸氢钠为缓冲体系，那么加载需要含5% CO2的环境内进行，以防止因CO2损失引起的培养基碱化。

b)      如果细胞加载培养基含血清，那需适当提高AM探针工作浓度，以补偿因AM探针与血清蛋白结合引起的损失。

c)      某些情况下，对分子量接近或超过1000的AM探针，需用不含AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育20-60min，以保证细胞内酯酶能充分降解AM基团。

d)      探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异，请根据具体的细胞类型来优化。

e)      对每一种探针有必要通过校准（calibration）来得到实际解离常数（Kd）。物理条件如温度，pH，离子强度或溶液粘度，以及探针与细胞组成成分如蛋白质的相互作用，都会影响Kd值。实际情况细胞内的Kd比体外溶液通常要高。因此，细胞水平研究有必要进行校准确认实际Kd值。

f)       对于EPG-2，虽然最大激发波长在517m，但其极强的荧光亮度使其能够用标准的488nm滤片来激发，与Fluo系列的可见光钙离子指示探针检测手段一致。值得注意的是，488nm激发下得到的荧光强度约为最大激发波长下的40%。

注意事项

1）   EPG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用无水DMSO溶解，配制储存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分装避免反复冻融，至少3个月稳定。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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引用文献：

[1]Zhang P, Qiu Y, Wang Y, Xiao L, Yu S, Shi M, Ni Y, Miron RJ, Pu Y, Zhang Y. Nanoparticles Promote Bacterial Antibiotic Tolerance via Inducing Hyperosmotic Stress Response. Small. 2022 May;18(19):e2105525. doi: 10.1002/smll.202105525. Epub 2022 Apr 10. PMID: 35398987.

E. coli and S. aureus were stained with 2 µm EPG-2 (Shanghai Maokang Biotechnology Co., MX4513)