Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)  

植物原生质体转化试剂盒（PEG法）

产品关键词：

Plant Protoplast 植物原生质体；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介导的原生质体转化；Yakult Honsha；Cellulase R-10纤维素酶R-10；Macerozyme R-10离析酶R-10；二乙酸荧光素(FDA) 原生质体活力检测；

产品信息

【温馨提示】：见我司（MKBio）整理的植物细胞壁降解酶/消化酶产品专题。

【温馨提示】：MX7383仅含原生质体转化所需的试剂，若需原生质体制备的话，请选择MX7381或MX7382。

产品描述

原生质体（Protoplast）是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分，体外培养条件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生细胞壁，进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具摄取外源大分子、细胞器，以及细菌、病毒的能力，从而原生质体是进行遗传操作，基因转移的良好材料；3）通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，从而培育出具有抗病原或更高产量的新品种。

原生质体（Protoplast）的制备最主流的技术是酶解法，因其具有消化温柔，操作简单，且良好维持原生质体完整性的特点。工作原理是根据植物细胞壁的结构特征选择合适的酶进行处理，植物细胞壁主要由多糖（纤维素、半纤维素、果胶等）以及少量的蛋白和脂质构成。因此，通过使用纤维素酶、离析酶、半纤维素酶、果胶酶等复合酶来降解细胞壁，即可得到原生质体。

原生质体（Protoplast）的转化方法很多，主要有PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。本试剂盒利用的是PEG介导的原生质体转化法，利用PEG短时间内对原生质体产生的冲击效应，促使质粒DNA、RNA或蛋白质进入原生质体，经转化后的原生质体培养一段时间后，可用于检测外源基因的表达或基因编辑效果等研究。本试剂盒操作简单和便捷，含原生质体转化需要的试剂，按照每次转化100μl原生质体溶液，可做至少40次转化。

试剂盒组分

保存与运输方法

保存：-20℃保存，1年有效。 

运输：室温运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 需要准备材料

二、 原生质体转化

2.1按照以下表1，根据实际样品量配制所需的即用型转化溶液D，需在转化开始前至少1h配制转化溶液，以确保转化试剂能充分的溶解。转化溶液建议配制当天使用。配制好的转化溶液于4℃保存3-5天内会维持相对较好的转化效率，但与现配的转化溶液相比，转化效率会有一定程度的下降。

2.2取10μl质粒DNA（10-20μg，浓度为1-2μg/μl）于1.5ml离心管。

【注①】：质粒大小建议在5-10kb，质粒浓度建议在1-2μg/μl。原生质体转化对质粒的纯度要求较高，尽量使用高纯质粒。多个质粒同时转化时的体积和总质量保持不变。多个质粒转化时，每种质粒的用量比例，根据实际情况自行调整。

2.3 加入100μl原生质体溶液（原生质体密度为2×105个/ml，约2万个原生质体），轻柔混匀。

2.4 加入等体积（110μl）新鲜配制的即用型转化溶液D，轻柔完全混匀，室温25℃孵育5-15min，间歇轻柔混匀。

【注①】：通常孵育5min足够，但需要根据实际体系来优化调整，最长孵育15min。

2.5 加入2倍体积（440μl）溶液B，轻柔完全混匀，终止转化过程。

2.6 于100×g，室温离心1-2min，吸掉上清。

【注①】：由于转化后的溶液非常粘稠，加入溶液B后离心1min通常可以使得原生质体聚集在管底，但是，使用某些突变体时为了减少原生质体损失，可以延长离心时间到2min。

2.7 加入500μl溶液B轻轻重悬原生质体，于100×g，室温离心1min，吸掉上清。此步目的是为了充分去除转化液内残留组分，避免后续可能产生的负面影响。

2.8 将沉淀重悬于1ml溶液E中，轻柔混匀。

三、 原生质体培养和收集

3.1 将离心管水平放置，于25℃弱光培养2-16h。

【注①】：根据特定实验确定孵育时间。RNA分析一般孵育2-6h；酶活性分析和蛋白标记一般孵育2-16h。基因编辑效果可能在24h后被检测到。

3.2 【可选】于100×g，室温离心2min收集原生质体，去掉大部分上清。

3.3 【可选】原生质体沉淀重悬于剩余溶液中，-80℃保存。

相关产品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。