目录号 | MF2493-1000UL | 售价 | 408.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | -80℃保存,六个月有效。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 订购数量 |
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产品简介: S17-1 λpir Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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菌株描述 S17-1 λpir菌株的染色体整合了RP4-2质粒,该质粒可携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。S17- 1 λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA1),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA1)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的链霉素抗性。
S17-1 λpir菌株基因型:RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510
产品描述 本品是大肠杆菌S17-1 λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。 2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。 5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。 6) 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取,推荐选用TB培养基(Terrific Broth),优于LB或SOC。 7) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。 2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜(12-15h)。
【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。 b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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