Alkaline Phosphatase(Calf Intestine), Molecular Biology Grade

小牛肠碱性磷酸酶（分子生物学级别）

产品信息

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产品内容

产品描述

碱性磷酸酶（Phosphatase, Alkaline，ALP，EC 3.1.3.1），是一种含两个相同亚基的二聚体，也是一种约含12%碳水化合物（6%己糖和6%其他中性糖）的糖蛋白，每个ALP分子含4个锌离子和4个二硫键。镁离子存在情况下，ALP可达到最高酶活。AP能催化磷酸单酯水解，比如对硝基苯酚磷酸盐（pNPP）、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

碱性磷酸酶（ALP）常用来偶联抗体和其他蛋白，从而满足ELISA、WB和组织化学检测上的应用。通常用来蛋白的去磷酸化实验，比如酪蛋白和核酸等。当需要高检测灵敏度时也能用来蛋白标记。还可用在DNA或RNA的5′-末端去磷酸以防止自连。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后，DNA或RNA还可被放射性标记磷酸盐标记（通过T4多核苷酸激酶）。

本品是由分子量为50,000的单体组成的二聚体，活性形式为含有Zn2+的糖蛋白的金属酶。本品是酵母重组表达的小牛肠（Calf Intestine）碱性磷酸酶，与大肠杆菌来源的酶相同，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。达分子生物学级别，适用于去除载体DNA片段的5′-末端的磷酸基团。

活性定义

在37℃，pH9.8反应条件，每min内水解对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生成1 μmol对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定义为1个活性单位(unit)。

保存与运输方法

保存：-20℃冻存，1年稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 本品最佳pH 8-10，最佳酶活受底物类型、底物浓度和离子浓度影响。本品正常保存稳定性很高，在螯合剂存在条件下，经65℃,30min加热处理，99%活性不可逆失活（反应条件不同可能会有例外）。建议失活处理时使用苯酚，可使其完全失活。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【DNA的去磷酸化，仅做参考】

1、在离心管内配制下列反应液：

2、37℃或50℃反应30min。也可以先在37℃反应15min，之后再50℃反应15min。

3、苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次；

4、氯仿/异戊醇（24:1）抽提；

5、添加2.5μl的3M NaCl（终浓度为150mM）.

6、添加125μl的冰乙醇，在-20℃放置30~60min，离心。

7、用200μl 70%冰乙醇洗涤DNA沉淀并干燥。

8、用≤20μl的TE Buffer溶解沉淀。

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