目录号 | MF2339-5000UL | 售价 | 1696.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 50×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | -80℃保存,六个月有效。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 订购数量 |
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产品简介: Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签: Rosetta-gami 2(DE3);Rosetta-gami B(DE3);BL21(DE3);TunerTM;Origami;Rosetta; 产品订购:更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-54736159 。网站:www.maokangbio.com。
菌株描述 Rosetta-gami 2菌株融合了Rosetta 2和Origami 2两大菌株的关键特征,不仅增强细胞质中二硫键的形成,而且提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。
→pRARE2赋予其Rosetta 2菌的特征,补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。
→gor522::Tn10 trxB赋予其Origami 2菌的特征,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。
DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。
Rosetta-gami 2(DE3)菌株具有氯霉素,链霉素和四环素抗性。兼容于具氨苄或卡那霉素抗性的载体。 Rosetta-gami 2(DE3)菌株基因型:Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
产品描述 本品是大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
2) 最好在冰上融化感受态细胞,插入冰内8min内加入目的DNA,不可在冰上放置过长,否则转化效率会降低。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低
6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。 7) 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间、温度、IPTG浓度(0.1~2mM)都需进行优化。
8) Rosetta-gami 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吹打),冰浴静置25min。
2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含34 µg/ml氯霉素和所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。
【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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