TOP10 Electrocompetent cell

大肠杆菌电转感受态细胞

产品标签：

TOP10；DH5α Electrocompetent Cell 电击感受态细胞； DH10B；XL1-Blue；1mm电转杯（电击杯）；Biorad1652083；

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菌株描述

TOP10菌株类似于DH10B菌株，具有以下特征：1）hsdR使其对PCR扩增产物来源非甲基化DNA实现有效转化；2）mcrA使其对基因组制备物来源的甲基化DNA实现有效转化；3）lacZΔM15使其能对重组克隆实现蓝白斑筛选；4）endA1确保得到更高纯化的DNA，下游应用得到更好的结果，归因于内切酶I非特异性酶切活性的缺失；5）recA1降低克隆DNA非特异性重组的频率。TOP10是目前实验室最常用的克隆菌株之一，适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定复制。

TOP10菌株基因型：F- mcrA Δ( mrr-hsdRMS- mcrBC) Φ80 lacZΔM15 Δ lacX74 recA1 araΔ139 Δ( ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

产品描述

本品是大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺制作所得的电击感受态细胞，只能用于DNA的电击转化，不能用于热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞最好保存在-80℃以下，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3） 加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。DNA不纯或存在盐、乙醇、蛋白及缓冲液等污染时，会导致转化效率急剧下降。

4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5） 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

6） 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

7） 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

8） 对于连接产物转化：最好在转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液重悬产物，保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

9） 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头（普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm）。避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2）取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。加入目的DNA（质粒或连接产物），用手拨打管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

【注意】：①若需要测定转化效率，使用1μl对照质粒pUC19（10 pg/μl）；②对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE buffer（货号：MS3537-500ML）重悬，DNA浓度不要超过100ng/μl，体积不超过5μl/50μl感受态。

3）用200μl枪头（用刀切掉0.5cm枪尖）将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4）启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1800 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5）2min后从冰中取出电击杯，放室温，加入700μl不含抗生素的无菌S.O.C.培养基（室温），用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管（比如：BD Falcon 50ml锥形离心管），向离心管中补加S.O.C.培养基至10ml。倾斜45℃后放入摇床，37℃，225 rpm复苏60min。

6) 5000rpm，1min离心收菌，重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的S.O.C.平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17h。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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